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손바닥선인장 추출물의 플라보노이드 구조 규명 및 HPLC-PDA를 이용한 지표성분의 함량 분석
박승배(Seungbae Park),강동현(Dong Hyeon Kang),진창배(Changbae Jin),김형자(Hyoung Ja Kim) 한국식품영양과학회 2017 한국식품영양과학회지 Vol.46 No.2
손바닥선인장으로부터 기능성식품 개발을 위하여 최적의 에탄올 추출물 탐색과 HPLC-PDA 분석방법에 의한 validation을 실시하였다. 지표성분으로 dihydrokaempferol (DHK)과 3-O-methylquercetin(3-MeQ)을 선정하여 표준화를 실시하였으며 검출법 확립을 위한 정량분석은 Luna RP-18 칼럼(4.6×250 mm, 5 μm)을 이용하여 1% 인산용액과 아세토니트릴을 전개 용매로 사용하였다. 용출은 1.0 mL/min의 유속으로 기울기 용출(gradient elution) 방법을 이용하였으며, 280 nm 파장에서는 DHK를, 360 nm 파장에서는 3-MeQ를 검출한 피크 면적을 이용하여 검량곡선을 작성하여 분석하였다. 본 연구에서 확립한 분석법으로 특이성, 직선성, 정밀성, 정확성, 회수율을 검색하였다. DHK의 검량선으로부터 상관계수(R2) 0.9998의 우수한 직선성과 intra-day와 inter-day 분석에서 97% 이상의 회수율과 3% 미만의 RSD를 나타내 정밀성과 정확성을 입증하였다. 3-MeQ의 검량선으로부터 상관계수(R2) 1의 우수한 직선성과 intra-day와 inter-day 분석에서 95% 이상의 회수율과 7% 미만의 RSD를 나타내 정밀성과 정확성을 입증하였다. DHK의 검출한계는 1.38 μg/mL, 정량한계는 4.18 μg/mL로 나타났으며, 3-MeQ의 검출한계는 3.49 μg/mL, 정량한계는 10.6 μg/mL로 나타났다. 손바닥선인장 에탄올 추출물 (OFSEs)은 70과 80°C에서 50, 70, 80% 에탄올로 3, 4, 5, 6시간 동안 각각 추출하였으며, 지표물질의 검량곡선을 활용하여 각각의 OFSEs로부터 두 종의 지표물질 함량을 분석하였다. 본 시험법으로 분석한 지표물질의 함량은 80°C에서 추출한 70% OFSE가 DHK 26.42±0.65 mg/OFS 100 g, 3-MeQ 3.88±0.29 mg/OFS 100 g의 함량을 나타내 가장 우수하게 나타났다. 다양한 OFSEs에 대하여 DPPH 자유 라디칼 소거효능과 쥐의 간 균질액을 이용한 지질과산화 저해 효능에 대한 항산화 효능은 지표물질의 함량이 가장 높은 70% OFSE에서 우수한 효능을 나타내 본 연구에서 확립한 원료 표준화를 위한 적합한 분석법임이 검증되었다. 따라서 본 연구를 통하여 HPLC-PDA를 이용한 손바닥선인장 에탄올 추출물의 DHK와 3-MeQ의 분석법은 개별인정형 건강기능식품 기능성 원료 개발을 위한 유용한 자료로 활용될 것으로 생각한다. This study aimed to establish an optimal extraction process and high-performance liquid chromatography (HPLC)-photodiode array (PDA) analytical method for determination of marker compounds, dihydrokaempferol (DHK) and 3-O-methylquercetin (3-MeQ), as a part of materials standardization for the development of health functional foods from stems of Opuntia ficus-indica var. saboten (OFS). The quantitative determination method of marker compounds was optimized by HPLC analysis, and the correlation coefficient for the calibration curve showed very good linearity. The HPLC-PDA method was applied successfully to quantification of marker compounds in OFS after validation of the method in terms of linearity, accuracy, and precision. Ethanolic extracts from stems of O. ficus-indica var. saboten (OFSEs) were evaluated by reflux extraction at 70 and 80°C with 50, 70, and 80% ethanol for 3, 4, 5, and 6 h. Among OFSEs, OFS70E at 80°C showed the highest contents of DHK and 3-MeQ of 26.42±0.65 and 3.88±0.29 mg/OFS 100 g, respectively. Furthermore, OFSEs were determined for their antioxidant activities by measuring 1,1-diphenyl-2-picrylhydrazyl (DPPH) radical scavenging and lipid peroxidation (LPO) inhibitory activities in rat liver homogenate. OFS70E at 70°C showed the most potent antioxidant activities with IC50 values of 1.19±0.11 and 0.89±0.09 mg/mL in the DPPH radical scavenging and LPO inhibitory assays, respectively. To identify active components of OFS, various chromatographic separation of OFS70E led to isolation of 11 flavonoids: dihydrokaempferol, dihydroquercetin, 3-O-methylquercetin, quercetin, isorhamnetin 3-O-glucoside, isorhamnetin 3-O-galactoside, narcissin, kaempferol 7-O-glucoside, quercetin 3-O-galactoside, isorhamnetin, and kaempferol 3-O-rutinoside. The results suggest that standardization of DHK in OFSEs using HPLC-PDA analysis would be an acceptable method for the development of health functional foods.
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섬쑥부쟁이 에탄올 추출물의 잔틴산화효소 저해 효능 및 HPLC-UV를 이용한 유효성분의 함량 분석
강동현(Dong Hyeon Kang),한은혜(Eun Hye Han),진창배(Changbae Jin),김형자(Hyoung Ja Kim) 한국식품영양과학회 2016 한국식품영양과학회지 Vol.45 No.11
섬쑥부쟁이로부터 고요산혈증 개선에 도움을 주는 기능성 식품 개발을 위하여 최적의 에탄올 추출물 탐색과 high performance liquid chromatography-ultraviolet(HPLCUV) 분석방법에 의한 validation을 실시하였다. 지표성분으로 3,5-dicaffeoylquinic acid(3,5-DCQA)를 선정하여 표준화를 실시하였으며 검출법 확립을 위한 3,5-DCQA 정량분석은 Luna RP-18 칼럼(4.6×250 mm, 5 μm)을 이용하여 1% 초산용액과 메탄올을 전개용매로 사용하였다. 용출은 1.0 mL/min의 유속으로 기울기 용출(gradient elution) 방법을 이용하였으며, 320 nm 파장에서 검출한 피크 면적을 이용하여 검량곡선을 작성하여 분석하였다. 본 연구에서 확립한 분석법으로 특이성, 직선성, 정밀성, 정확성, 회수율을 검색하였다. 3,5-DCQA의 검량선으로부터 상관계수(R²)0.9999의 우수한 직선성과 intra-day와 inter-day 분석에서 90% 이상의 회수율과 5% 미만의 RSD를 나타내 정밀성과 정확성을 입증하였다. 검출한계는 2.68 μg/mL였고 정량한계는 8.11 μg/mL로 나타났다. 섬쑥부쟁이 에탄올 추출물(AGE)은 70과 80°C에서 30, 50, 70, 80% 에탄올로 3, 4,5, 6시간 동안 각각 추출하였으며, 지표물질의 검량곡선을 활용하여 각각의 AGE로부터 3,5-DCQA의 함량을 분석하였다. 본 시험법으로 분석한 3,5-DCQA의 함량은 70°C에서 추출한 70% AGE가 52.59±3.45 mg/Aster glehni 100g의 함량을 나타내 가장 우수하게 나타났다. 그러나 섬쑥부쟁이 추출물에 함유된 5-caffeoylquinic acid(5-CQA)의 함량 비교분석은 에탄올 함량이나 추출 시간에 따른 함량 변화가 미미하게 나타났다. 또한, 다양한 AGE에 대하여 XOD저해 효능을 검색하였을 때, 3,5-DCQA의 함량이 가장 높은 70°C에서 추출한 70% AGE에서 우수한 효능을 나타내 기능성 원료 표준화를 위한 적합한 분석법임이 검증되었다. 따라서 본 연구를 통하여 확립된 3,5-DCQA의 분석법은 섬쑥부쟁이 에탄올 추출물로부터 개별인정형 건강기능식품기능성 원료 개발을 위한 유용한 자료로 활용될 것으로 생각한다. This study aimed to establish an optimal extraction process and high performance liquid chromatography-ultraviolet (HPLC-UV) analytical method for determination of 3,5-dicaffeoylquinic acid (3,5-DCQA) as a part of materials standardization for the development of a xanthine oxidase inhibitor as a health functional food. The quantitative determination method of 3,5-DCQA as a marker compound was optimized by HPLC analysis using a Luna RP-18 column, and the correlation coefficient for the calibration curve showed good linearity of more than 0.9999 using a gradient eluent of water (1% acetic acid) and methanol as the mobile phase at a flow rate of 1.0 mL/min and a detection wavelength of 320 nm. The HPLC-UV method was applied successfully to quantification of the marker compound (3,5-DCQA) in Aster glehni extracts after validation of the method with linearity, accuracy, and precision. Ethanolic extracts of A. glehni (AGEs) were evaluated by reflux extraction at 70 and 80°C with 30, 50, 70, and 80% ethanol for 3, 4, 5, and 6 h, respectively. Among AGEs, 70% AGE at 70°C showed the highest content of 3,5-DCQA of 52.59±3.45 mg/100 g A. glehni. Furthermore, AGEs were analyzed for their inhibitory activities on uric acid production by the xanthine/xanthine oxidase system. The 70% AGE at 70°C showed the most potent inhibitory activity with IC50 values of 77.01±3.13∼89.96±3.08 μg/mL. The results suggest that standardization of 3,5-DCQA in AGEs using HPLC-UV analysis would be an acceptable method for the development of health functional foods.
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