진피세포의 조성이 인공피부의 기저막과 표피형성에 미치는 영향

이해란 ( Hailan Li ),정효순 ( Hyo-soon Jeong ),김잔디 ( Jandi Kim ),윤혜영 ( Hye-young Yun ),백광진 ( Kwang Jin Baek ),권년수 ( Nyoun Soo Kwon ),민영실 ( Young Sil Min ),박경찬 ( Kyoung-chan Park ),김동석 ( Dong-seok Kim ) 대한화장품학회 2012 대한화장품학회지 Vol.38 No.3

최근 유럽연합에서는 동물실험을 통하여 검증된 성분을 함유하고 있는 화장품에 대하여 판매를 금지할 것을 선언하였다. 그리하여 동물실험을 대체할 동물실험 대체모델의 개발이 필요해졌다. 인공피부는 화장품, 의약품 및 의료기기의 안전 테스트에 있어서 아주 중요한 시스템이다. 본 연구에서는 기저막과 표피를 가지고 있는 최적의 인공피부를 만들기 위한 시도를 하였다. 이러한 목적으로 중간엽줄기세표(MSCs, mesenchymal stem cells)와 지방전구세포를 진피세포인 섬유모세포와 혼합하여 진피대체물을 만들었다. 기저막과 표피의 형성은 면역조직화학 염색(immunohistochemical stains)을 통하여 확인하였다. 여러 가지 모델 중에서, 중간엽줄기세포를 혼합한 모델에서 표피의 두께가 제일 두꺼웠으며 또한 PCNA와 involucrin의 분포가 실제 사람피부와 비슷하였다. 결론적으로, 본 연구의 결과는 진피대체물에 중간엽줄기세포를 혼합한 인공피부가 동물실험 대체모델로 개발될 수 있다는 점을 제시한다. European Union prohibited the marketing of cosmetic products containing constituents that have been examined through animal experiments. Thus, non-animal test models are needed to replace animal experiments. The reconstructed skin models are important as a test system for cosmetic, pharmaceutical, and medical device safety testing. In the present study, we tried to develop an optimal skin equivalent model containing basement membrane and epidermis. For this purpose, we used mesenchymal stem cells (MSCs) and/or preadipocytes as well as fibroblasts as the dermal matrix cells. The formation of basement membrane and epidermis was verified by immunohistochemical stains. Among various models, the epidermis was thickest when MSCs were used in the dermal matrix. Furthermore, PCNA and involucrin distribution showed that dermal matrix with MSCs resembled human skin. Therefore, skin equivalents with MSCs could be developed as a non-animal test model to replace animal experiments.

녹각교 함유 인공피부를 이용한 피부독성도의 검사

김잔디 ( Jandi Kim ),이해란 ( Hailan Li ),정효순 ( Hyo-soon Jeong ),윤혜영 ( Hye-young Yun ),백광진 ( Kwang Jin Baek ),권년수 ( Nyoun Soo Kwon ),최혜령 ( Hye-ryung Choi ),박경찬 ( Kyoung-chan Park ),김동석 ( Dong-seok Kim ) 대한화장품학회 2013 대한화장품학회지 Vol.39 No.1

피부 자극과 부식 검사에 사용되는 동물실험을 대체하기 위한 방법으로 인공피부가 개발되어 왔다. 최근에 본 연구진은 녹각교를 함유하는 새로운 인공피부를 구축하였다. 현재 연구에서는 녹각교를 포함하는 인공피부를 사용하여 물질의 독성도 검사를 수행하였다. 그리하여 sodium dodecylsulfate (SDS) 또는 sodium carbonate를 인공피부에 도포하였고 표피의 손상 정도를 H&E와 면역조직화학 염색을 통하여 평가하였다. 인공피부의 표피는 SDS와 sodium carbonate에 의해 농도 의존적으로 영향을 받았다. 더 나아가 이들 물질에 의하여 p63의 발현이 감소하였다. 그러므로 녹각교를 함유하는 인공피부는 동물실험을 대체할 수 있는 모델로써 사용될 수 있고 in vitro에서 자극과 부식 검사 시험법의 발전에 도움을 줄 것으로 예상된다. To substitute animal test, skin equivalents (SEs) have been developed for skin irritation and corrosion test. Recently, we have developed new SEs containing Cervi cornus Colla (CCC). In the present study, we used the SEs for cutaneous cytotoxicity test. Sodium dodecylsulfate (SDS) or sodium carbonate was applied to the SEs, and the epidermal damage by H&E and immunohistochemical stains was evaluated. Our results showed that SDS or sodium carbonate affected the epidermal part of SEs containing CCC in a dose-dependent manner and decreased the expression of p63. It is concluded that SEs containing CCC could be used for an alternative model of animal test and would be greatly helpful in the development of in vitro irritation and corrosion test.

위장관 간질종양에 관련된 유전자의 돌연변이

류승완(Seung Wan Ryu),정창욱(Chang Wook Jeong),황재연(Jae Youn Hwang),김인호(In Ho Kim),정효순(Hyo Soon Jeong),강유나(Yu Na Kang),손수상(Soo Sang Sohn),김대광(Dae Kwang Kim) 대한외과학회 2005 Annals of Surgical Treatment and Research(ASRT) Vol.68 No.2

피부 편평상피암 세포주에서 p53 유전자의 특성

김욱(Yu Jin),문용석(Yong-Suk Moon),정효순(Hyo-Soon Jeong),장성익(Sung-Ik Jang),최인장(In-Jang Choi) 대한해부학회 2004 Anatomy & Cell Biology Vol.37 No.3

p53 종양 억제 유전자의 변이는 원발성 종양에서 발견된 유전자변이 중 가장 흔하다. 같은 종류의 종양이라도 가지고있는 p53 유전자의 세부적 특성에 따라 종양의 발생과 진행 양상 그리고 약제에 대한 반응이 다를 수 있다. 이에 본 연구는 면역세포화학법, PCR-SSCP, 염기서열분석 및 Western blot 분석방법을 이용하여 4개의 피부 편평상피암 세포주에서 p53 유전자의 특성을 조사하였다. 그 결과 4개의 세포주 중 3개의 피부 편평상피암 세포주에서 돌연변이가 검출되었다. 즉, KUMA3 세포주의 codon 176에서 T가 A로, codon 281에서 G가 A로, KUMA4 세포주의 codon 241에서 CC가 TT로 그리고 KUMA6 세포주의 codon 266에서 G가 T로의 치환이 관찰되었다. p53 유전자 codon 72의 단일염기 다형태에서는 KUMA3과 KUMA4 세포주는 Arg/Pro 이형접합체로, KUMA5 세포주는 Arg/Arg 동형접합체로 그리고 KUMA6 세포주는 Pro/Pro 동형접합체로 나타났다. 이러한 결과들은 다양한 편평상피암종의 p53 유전자 연구에 유용한 자료가 될 것이다. The mutation of p53 tumor suppressor gene is the most common genetic variation of primary malignant tumors. The occurrence, progression and reaction for medical management of cancers can be different according to the characteristics of p53 gene, even if they are same kinds of malignant tumors. In this study, the property of p53 gene in 4 kinds of squamous cell carcinoma cell lines were investigated by using immunocytochemistry, PCR-SSCP, sequencing and Western blot methods. As a result, p53 mutation detected in 3 kinds of squamous cell carcinoma cell lines. Namely, it is found that T in codon 176 changed to A, and G in codon 281 changed to A in KUMA3 cell lines; CC in codon 241 changed to TT in KUMA4 cell lines; G in codon 266 changed to T in KUMA6 cell lines. In single nucleotide polymorphism of codon 72 of p53 gene, the genetic variations are Arg/Pro heterozygote in KUMA3 and KUMA4 cell lines; Arg/Arg homozygote in KUMA5 cell lines; Pro/Pro homozygote in KUMA6 cell lines. These results will provide useful data for p53 gene researches of various squamous cell carcinomas.

암세포주의 p53 단백질 발현에 대한 웅담의 영향

김 욱(Yu Jin),문용석(Yong-Suk Moon),정효순(Hyo-Soon Jeong),최인장(In-Jang Choi) 대한해부학회 2005 Anatomy & Cell Biology Vol.38 No.1

본 연구는 세포자멸사에서 중요한 역할을 하는 p53 단백질 발현에 대한 웅담(bear bile)의 영향을 알아보기 위하여 Western blot 분석과 RT-PCR 분석 방법을 이용하여 p53 유전자 특성이 서로 다른 암세포주를 대상으로 p53 단백질 발현의 변화를 조사하였다. 그 결과 p53 유전자에 돌연변이가 있는 HaCaT, KUMA3, KUMA4 및 KUMA6 세포주에서는 웅담처리에 의해 p53 단백질 발현이 증가하였으나, 돌연변이가 없는 HCT116과 KUMA5 세포주에서는 p53 단백질 발현의 변화가 없었다. 또한, 모든 세포주에서 웅담처리에도 불구하고 p53 mRNA의 양적 변화는 관찰할 수 없었다. 이러한 결과들은 웅담처리에 의한 p53 단백질의 증가가 단백질 합성의 증가가 아니라 단백질 안정성의 증가를 유도하였음을 추측할 수 있다. 결론적으로 웅담에 대한 종양세포의 감수성은 p53 유전자의 특성에 따라 다르다는 것을 알 수 있었다. 즉, 웅담처리는 p53 유전자에 돌연변이가 있는 세포주의 변이형 p53 단백질에만 영향을 주었다. The effects of bear bile on the expression of the p53 protein in cancer cell lines were investigated by Western blot and RT-PCR methods. The p53 protein expression was increased after addition of bear bile in HaCaT, KUMA3, KUMA4 and KUMA6 cell lines that carried mutations in the p53 gene, but it is not increased in HCT116 and KUMA5 cell lines with the normal p53 gene as determined by Western blot method. The level of p53 mRNA was not altered in all cell lines after the treatment of bear bile as determined RT-PCR. These results indicate that the increment of the p53 protein after addition of bear bile was caused by increase in the protein stability but not by increase in protein synthesis. It can be concluded that bear bile affects positively only in the cell lines which have genetic variation of the p53 gene, and does not affect in the cell lines which have wild-type p53 gene, on the other hand.

플라보노이드의 세포 신호전달 조절

이응룡,강근호,강용진,김우열,최혜연,김봉우,정효순,조쌍구 충남대학교 형질전환복제돼지연구센터 2007 논문집 Vol. No.10

Many studies revealed the neuroprotective, cardioprotective, and chemopreventive actions of dietary flavonoids. The plausible mechanistic interpretation of the various effects of flavonoids was concentrated on the anti-oxidant or free radical-scavenging properties of these phytochernicals, both in model systems and under in vivo conditions. While there has been a major focus on the anti-oxidant properties. there is an emerging view that flavonoids and their in vivo metabolites. do not act as conventional hydrogen-donating anti-oxidants. but they may exert regulatory functions in cells through actions at protein kinase or lipid kinase signaling pathways. Flavonoids and more recently their metabolites. have been reported to act at phosphoinositide 3-kinase(PI 3-kinase). Akt/protein kinase B(Akt/PKB), protein kinase C (PKC), mitogen activated protein kinase(MAP kinase), and various tyrosine kinases signaling cascades. Inhibitory or stimulatory actions at these pathways are likely to affect cellular function profoundly by altering the phosphorylation state of target molecules and by modulating gene expression. A clear understanding of the mechanisms of action of flavonoids, either as anti-oxidants or modulators of cellular signaling pathways, and the influence of their metabolism on these properties are key to the evaluation of these potent biomolecules as anti-cancer agents, cardio-protectants, and inhibitors of neurodegeneration.