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Production of Anti-Hepatitis B Surface Antigen Monoclonal Antibody in Serum-Free Medium
Chun, Bok Hwan,Jo, Eui Cheol,Kim, Dong Il,Paik, Sung Bok 한국산업미생물학회 1990 한국미생물·생명공학회지 Vol.18 No.2
간염 바이러스 표면 항원에 대한 단일클론 항체를 생산하는 하이브리도마 세포 2c3.1의 대량배양을 위하여 무혈청 배지를 조성하였다. 2c3.1 세포를 RPM1 1640 배지와 Ham's F12 배지의 여러 부피비에 배양함으로써 세포성장이 가장 좋은 비의 배지를 기본 영양배지로 선택하였다. 세포 성장을 증가시키기 위하여 무혈청 배지 첨가물들을 여러 농도로 변화시켜 기본영양배지에 첨가함으로써 각 첨가물들의 농도를 결정하였다. 무혈정 배지 첨가물은 0.45% 인혈청 알부민, 10㎍/㎖ insulin, 10㎍/㎖ transferrin 등을 사용하고, 0.17㎍/㎖ fat emulsion(Intralipos^R:0.125㎍/㎖ soybean oil, 0.015㎍/㎖ ovolecithin, 0.03㎍/㎖ glycerin), 0.01㎍/㎖ 비타민 E와 0.02㎍/㎖ 비타민 E 아세테이트, 그리고 10uM monoethanolamine 등의 적정 농도를 2c3.1 세포의 무혈청 배양에 사용하였다. 이 무혈정 배지에서 대수 증가적으로 증식하는 하이브리도마 세포는 10% 우태아혈청을 사용한 배지에서 보다 비증식속도와 최대 세포농도에서 다소 낮으나, 단일클론항체는 혈청 사용 배지의 43㎍/㎖보다 다소 높은 50㎍/㎖가 생성됨으로써 이 하이브리도마로부터 단일클론항체를 생산하기 위하여 조성된 무혈정 배지가 10% 우태아혈청 배지를 대신할 수 있음을 보였다. For the large-scale cultivation of murine hybridoma 2c3.1 cells secreting anti-Hepatitis B surface antigen(anti-HBsAg)monoclonal antibody(MAb), we have constructed a serum-free medium. The serum-free medium was supplemented with human serum albumain, insulin, transferrin, fat emulsion(Intralipos^R:soybean oil, ovolecithin, glycerin), vitamin E, vitamin E acetate, and monoethanolamine in a mixture of RPMI 1640 and Ham's F12 medium. The cells in serum-free medium propagated logarithmically without lag period, and the maximum concentration of anti-HBsAg monoclonal antibodies secreted by 2c3.1 cells was higher than that in 10% fetal bovine serum(FBS) medium. The serum-free medium was enough to substitute 10% FBS medium in respect of MAb production.