Achrobacter Protease I ( API )의 기질특이성의 전환

임성일,최청 ( Seong Il Lim,Cheong Choi ) 한국응용생명화학회 1997 Applied Biological Chemistry (Appl Biol Chem) Vol.40 No.3

Assuming that Asp225 is the substrate specificity determinant of Achromobacter protease I (API) which is lysine-specific serine protease, the 225th residue was substituted for other amino acids with a hope that the substrate specificity of a mutant API is altered. Furthermore, to maturate proform of mutant API autocatalytically, Lys(-1) was also replaced by Met, Asp, or Glu. However, all the mutants were not expressed, or accumulated as inactive precursor proteins. This result implicats that Asp225 plays a critical rol in restricted substrate specificity as a lysylendopeptidase but the substrate specificity of API is not determined only by the nature of residue 225.

Achromobacter Protease 1 ( API )의 기질특이성 결정기의 동정과 변이체 (D225E)의 Ornithine 기질에 대한 촉매활성

임성일,권오진,최청 ( Seong Il Lim,Oh Jin Kwon,Cheong Choi ) 한국응용생명화학회 1997 Applied Biological Chemistry (Appl Biol Chem) Vol.40 No.3

The structural basis of lysine specificity of Achromobacter protease I (API) was investigated by means of site-directed mutagenesis. The precursor protein in which G1u190, one of the two candidates for determining lysine specificity, was substituted by glutamine, aspartic acid or leucine was processed autocatalytically to attain full protease activity with lysine specificity. The substitution of the other candidate, Asp225, for asparagine or leucine produced no mature active forms of pro-API. The precursor protein of the mutant D225E slowly matured autocatalytically. The lysylendopeptidase activity of the mature D225E was 0.25% of that of native API, and this reduced activity is mainly due to a decrease in the affinity of the enzyme for lysine. These results suggest that Asp225 plays a critical rol in restricted substrate specificity as a lysylendopeptidase. However, D225E exhibited no measurable activity for synthetic ornithine substrate. Since the hydroxyl group of Ser194 in this mutant retained essentially the same reactivity to DFP or PMSF as that in native API, it can be noted that a methylene unit longer side chain of residue 225 is not compensated by a methylene unit shorter side chain at subsite P1 in the bound substrate.

Achromobacter Protease I (API)의 기질특이성 결정기의 동정과 변이체[D225E]의 Ornithine 기질에 대한 촉매활성

임성일,권오진,최청,Lim, Seong-Il,Kwon, Oh-Jin,Choi, Cheong 한국응용생명화학회 1997 Applied Biological Chemistry (Appl Biol Chem) Vol.43 No.2

부위특이적 변이제작을 통하여 Achromobacter protease I (API)의 lysin에 대한특이성의 구조적 근거를 조사하였다. Lysine 특이성을 결정하는 결정기로서 예상되는 잔기중의 하나인 Glu190을 glutamine, aspartic acid, leucine으로 치환하였을 경우, 전구체단백질은 Iysine 특이성을 가진 완전한 활성효소로서 발현되어 자기촉매적으로 processing되었다. 다른 하나의 잔기인 Asp225을 asparagine, leucine으로 치환한 변이체에서는 불활성 전구체인 pro-API으로서 발현되었으나, 변이체 (D225E)의 경우는 서서히 자기촉매적으로 maturation 되었다. 성숙체인 변이체 (D225E)의 Iysylendopeptidase 활성은 wild-type APl의 0.25%이였으며, 이 활성의 감소는 기질 Iysine과 효소와의 친화력 감소가 주 원인이었다. 이러한 결과로부터 Asp225가 Iysylendopeptidase의 엄격한 기질특이성에 결정적인 역할을 담당한다는 것이 시사되었다. 한편, 변이체 (D225E)는 ornithine 기질에 대해서 효소활성 이 검출되지 않았다. 이 변이체의 촉매잔기인 Ser194가 native API과 마찬가지로 DFP, PMSF와 근본적으로 동일한 반응성이 있는 것으로 나타나 225번 위치의 methylene 1 unit 더 긴 측사는 subsite P1의 methylene 1 unit 짧은 측사에 의해 보상되지 않는다는 것을 알 수 있었다. The structural basis of Iysine specificity of Achromobacter protease I (API) was investigated by means of site-directed mutagenesis. The precursor protein in which Glu190, one of the two candidates for determining Iysine specificity, was substituted by glutamine, aspartic acid or leucine was processed autocatalytically to attaln full pretense activity with lysine specificity. The substitution of the other candidate, Asp225, for asparagine or leucine produced no mature active forms of pro-API. The precursor protein of the mutant D225E slowly matured autocatalytically. The lysylendopeptidase activity of the mature D225E was 0.25% of that of native API, and this reduced activity is mainly due to a decrease in the affinity of the enzyme for lysine. These results suggest that Asp225 plays a critical rol in restricted substrate specificity as a lysylendopeptidase. However, D225E exhibited no measurable activity for synthetic ornithine substrate. Since the hydroxyl group of Ser194 in this mutant retained essentially the same reactivity to DFP or PMSF as that in native API, it can be noted that a methylene unit longer side chain of residue 225 is not compensated by a methylene unit shorter side chain at subsite P1 in the bound substrate.

Achrobacter Protease I (API)의 기질특이성의 전환

임성일,최청,Lim, Seong-Il,Choi, Cheong 한국응용생명화학회 1997 Applied Biological Chemistry (Appl Biol Chem) Vol.43 No.2

Lysine 특이적 serine protease인 Achromobacter protease I(API)의 기질특이성을 결정하는 아미노산 잔기가 255위치에 존재하는 가정하에 이 잔가에 변이를 도입하여 기질특이성의 변화 유무를 조사하였다. 그리고 pro-API이 자기촉매적으로 소화될 수 있도록 Lys(-1) 또는 다른 아미노산 잔기로 치환하였다. 그러나 예상과는 달리 제작된 모든 변이체는 발현되지 않았거나 불활성전구체로서 발현되었다. 이 결과로부터 225위치의 잔기는 API의 maturation과정에 있어 Iysylendopeptidase활성에 중요한 역할을 담당하고 있으나 APl의 기질특이성은 225위치 잔기의 특성에 한정되지 않을 가능성이 시사되었다. Assuming that Asp225 is the substrate specificity determinant of Achromobacter pretense I (APl) which is lysine-specific serine protease, the 225th residue was substituted for other amino acids with a hope that the substrate specificity of a mutant API is altered. Furthermore, to maturate preform of mutant API autocatalytically, Lys(-1) was also replaced by Met, Asp, or Glu. However, all the mutants were not expressed, or accumulated as inactive precursor proteins. This result implicats that Asp225 plays a critical rol in restricted substrate specificity as a lysylendopeptidase but the substrate specificity of API is not determined only by the nature of residue 225.

卵白단백질에 대한 감마선 조사의 영향

임성일(Seong-Il Lim),육홍선(Hong-Sun Yook),윤혜현(Hye-Hyun Yoon),김영지(Yeung-Ji Kim),변명우(Myung-Woo Byun) 한국식품영양과학회 1998 한국식품영양과학회지 Vol.27 No.2

계란과 오리알로부터 ovalbumin을 분리ㆍ정제하고 실온에서 0에서 100kGy까지의 감마선을 조사하여 비조사군과의 in vitro 소화율, 아미노산 조성 및 SDS-PAGE 패턴변화를 비교분석하였다. 100kGy까지의 감마선 조사는 소화율 및 아미노산 조성에 있어서 비조사군과 유의적인 차이가 없는 것으로 나타났다. SDS-PAGE 패턴에서 10kGy조사는 거의 변화가 없었으나 30kGy에서는 약 20%, 100kGy에서는 약 80%의 단백질이 분해되는 것으로 나타나 감마선 조사선량의 증가에 따라 단백질의 저분자량화가 일어났음이 시사되었다. The ovalbumins obtained from hen's and duck's egg white were irradiated with up to 100 kGy at room temperature. The purified proteins were evaluated for their in vitro digestibility by incubating successively with pepsin and pancreatin conjugate. Amino acid compositions and SDS-PAGE pattern in these proteins were also analyzed. The obtained results indicated that gamma irradiation within the tested dose range(up to 100 kGy) produced no statistically significant changes in the in vitro digestibility and amino acid compositions. Analysis of gamma-irradiated ovalbumins by SDS-PAGE revealed radiolysis of ovalbumin into proteins or peptides of low molecular weights.

배전계통 복구능력 평가방안 및 응용

林星日(Seong-Il Lim),陳保建(Bo-Gun Jin),李承宰(Seung-Jae Lee) 대한전기학회 2002 전기학회논문지A Vol.51 No.7

Inulinase 생산 균주의 분리 동정 및 효소 생산 최적조건

임성일(Seong Il Lim),이대희(Dae Hee Lee),홍석산(Seok San Hong),유진영(Jin Young Yoo) 한국미생물생명공학회 2000 Korean Journal of Applied Microbiology and Biotech Vol.28 No.3

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IEC61850 기반 변전소자동화시스템의 신뢰도 향상기법

임성일(Seong-Il Lim) 한국조명·전기설비학회 2008 조명·전기설비학회논문지 Vol.22 No.9

최근 IEC61850이 변전소자동화시스템의 국제표준으로 자리 잡고 있는데, 그 중에서도 보호IED의 신뢰도는 매우 중요하다. 본 논문에서는 IEC61850의 특징을 이용하여 보호IED의 신뢰도를 향상시키는 새로운 방법을 제시한다. 본 논문에서 제시하는 신뢰도 향상기법은 적은 수의 백업 IED를 사용하므로 경제적이면서도, 기존의 2계열화나 백업보호방식에 비하여 오부동작을 현저히 감소시킬 수 있다. 6모선 예제계통에 대한 모의실험을 통하여 본 논문에서 제시하는 신뢰도 향상기법의 유용성을 검증하였다. The effect of the fault could be propagated to healthy region when the fault on the power system is not cleared in time. In order to enhance reliability of the protective relay, a dual and/or backup system is adopted for the power system protection. The IEC61850 has become an international standard of the substation automation system for interoperability between heterogeneous IEDs from different vendors. This paper introduces a reliability enhancement technique for the substation automation system using characteristics of the IEC61850.

한국 전통 메주 유래의 Rhizopus stolonifer, Rhizopus oryzae 및 Absidia corymbifera가 생성하는 Protease의 특성

임성일(Seong-Il Lim),곽은정(Eun-Jung Kwak),최신양(Shin-Yang Choi),유진영(Jin Young Yoo) 한국식품영양과학회 2002 한국식품영양과학회지 Vol.31 No.2

전통 메주의 산업화를 위해서는 먼저 제조공정이 확립되어야 하며 이를 위해서는 적합한 종균이 개발되어야 한다. 재래식 메주로부터 Rhizopus stolonifer, Rhizopus oryzae 및 Absidia corymbifera를 분리하여 균주 유래 protease의 특성을 조사하여 장류산업에 있어 기초자료로 이용하고자 한다. 세 균주를 각각 배양한 밀기울 배지에서의 protease 최적 생산조건은 모두 30℃, 4일간이었으며 초기 pH에 의한 영향은 없었다. 30℃에서 4일간 각 균주를 배양하고 증류수로 조효소액을 추출하여 효소작용을 위한 최적 pH와 온도를 조사한 결과, 각각 pH 6.0, 50℃였고 pH 4.0~7.0의 범위인 약산성 영역과 40℃이하에서 안정하였다. 된장의 염도 범위를 고려해서 16% 이내의 염도에 의한 영향을 조사한 결과, 염농도는 효소활성에 거의 영향을 미치지 않았다. Rhizopus stolonifer, Rhizopus oryzae 및 Absidia corymbifera로부터 유래된 각 효소액의 Hammastein casein 기질에 대한 결합력과 가수분해속도를 비교한 결과 K_m은 각각 3.3×10^(-4), 0.75×10^(-4), 1.3×10^(-4) M로 상호간에 큰 차이가 없었으며, V_(max)도 17.2 ㎍/min, 9.4 ㎍/min, 7.8 ㎍/min으로 유사하였다. Protease production and its characteristics were investigated for Rhizopus stolonifer, Rhizopus oryzae and Absidia corymbifera which were isolated from Korean traditional meju. The optimum culture conditions of the strains for the production of protease in basic medium [wheat bran : 1% glucose solution=1 : 1 (w/v)] were 30℃ and 4 days. The optimum pH and temperature for the enzyme activity of crude enzymes produced by Rhizopus sto-lonifer, Rhizopus oryzae and Absidia corymbifera were pH 6.0 and 50℃, respectively. The enzymes were relatively stable at pH 4.0~7.0, at temperature below 40℃, and at NaCl concentration lower than 16%. The K_m value for Hammastein casein was 3.3×10^(-4), 0.75×10^(-4) and 1.3×10^(-4) M, and V_(max) value was 17.2 ㎍/min, 9.4 ㎍/min and 7.8 ㎍/min, respectively.

배전자동화 시스템의 복구기능 향상을 위한 Multi-Agent 기반의 분산형 정전복구 시스템

林星日(Seong-Il Lim),林一亨(Il Hyung Lim),崔勉松(Myeon Song Choi),李承宰(Seung Jae Lee),權成鐵(Sung Chul Kwon),河福男(Bok Nam Ha) 대한전기학회 2007 전기학회논문지 Vol.56 No.4

In order to improve the efficiency of service restoration function in the current Distribution Automation System (DAS), in this paper it is proposed a more advanced and efficient service restoration approach using Multi-Agent technique based on distributed networks. In the current DAS, communication networks or protocol structures are centralized with communications between the central station and FRTU through 1:1 connection. In order to maintain the current systems and enhance the proposed Multi-Agent based service restoration scheme, a device of communication and intelligence, named MASX, is newly developed to make a FRTU as an agent to cooperate each others. The proposed system applied in a demo system for an distribution automation system and shows 8 times reduction of restoration time in restoration of blackouts.