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먹는 샘물에서 분리한 Yersinia spp.의 분리 및 특성
이택수(Tex-Soo Lee),박부길(Boo-Kil Park),오덕환(Deog-Hwan Oh) 한국식품영양과학회 2001 한국식품영양과학회지 Vol.30 No.5
최근에 음용이 증가하고 있는 강원도지역 먹는 샘물로부터 Yersinia spp.의 분포현황을 조사하기 위하여 1999년과 2000년에 강원지역 18개 시군 전역에 산재한 공동샘터수 277건을 수거한 후 미국 FDA방법과 Bergey's manual을 참조하여 형태학적, 배양학적, 생화학적방법으로 균을 분리동정 하였으며 분리균의생물형, 혈청형, 항균제 감수성조사 및 효율적인 균분리방법에 대한 조사를 실시하였다. 샘터수 277건 중에 40건(14.4%)에서 Yersinia spp.가 분리되었으며, 균종별 분리빈도는 40건중에서 Y. enterocolitica 33주(82.5%)로 가장 많이 분리되었으며, Y. frederiksenii 4주(10%), Y. intermedia 2주(5%), Y. sakazaki 1주(2.5%) 순으로 분리되었다. 지역별로 Y. enterocolitica 분리실태를 보면 철원군(5주), 인제군(5주) 등 11개 군지역에서 평균 2.6주가 분리되었고, 태백시(2주), 춘천시(1주) 등 3개 시지역에서 평균 1.3주가 분리되어 군 소재 먹는 샘물이 도시지역 먹는 샘물에 비해 2배 정도 높은 균검출율을 나타내었다. 배양방법에 따른 Y. enterocolitica 분리율을 비교하면 시료를 KOH처리하여 직접 CIN 배지에 분리한 직접배양법에서는 분리율이 6.1%이었고, 시료를 PSBB배지에 10℃, 10일간 저온배양 후 KOH로 처리하여 CIN배지에 분리한 저온증균배양법에서 18.5%의 분리율을 나타내어 저온증균법이 직접법에 비해 3배 높은 균검출 효과를 나타내었다. 한편, Y. enterocolitica 33주에 대한 아형(subtype) 조사 결과 생물형 분포는 1A형이 22주(71.0%)로 가장 많았고 3A형 4주(12.9%), 3B형 3주(9.7%), 1B형과 5형이 각각 1주(3.2%)씩이었으며,혈철형 분포는 O : 5형이 4주(12.9%)로서 가장 많았으며 O : 3형 3주(9.7%), O : 8형 2주(6.5%) 및 O : 9형 1주(3.2%)이었고 나머지 21주(67.7%)는 혈청형을 확인할 수 없었다. 또한, 분리된 Y. enterocolitica의 12종 항생제에 대한 감수성 시험결과는 ampicillin, cephalothin, carbenicillin에 각각 70%, 70%, 52%의 저항성을 보였고 나머지 nalidixic acid, streptomycin, tetracycline, tobramycin, chloramphenicol, kanamycin, gentamycin, trimethoprim, ciprofloxacin에 대하여는 대부분 감수성을 나타내었으며, ampicillin, cephalothin, carbenicillin 등 3종 항생제에 다제내성을 보인 경우는 39%이었다. A total of 277 mineral spring water samples in Kangwon province from 1999 to 2000 were analyzed for the presence of Yersinia spp. by the conventional Food and Drug Administration protocol, and presumptive strains were identified by morphological, cultural and biochemical tests according to Bergey's manual. Also, the biotypes, serotypes, and susceptibility to 12 antibiotics were tested. Among the total 277 mineral spring water samples, 40 samples (14.4%) were found to be contaminated with Yersinia species. Among the 40 strains of Yersinia spp. isolates, 33 strains (82.5%) for Yersinia enterocolitica, 4 strains (10%) for Yersinia frederiksenii, 2 strains (5%) for Yersinia intermedia, and 1 strain (2.5%) for Yersinia sakazaki were identified, respectively. Of 40 Yersinia spp. isolates, Yersinia enterocolitica (82.5%) was the most predominant species in the mineral spring water samples compared to other Yersinia species. Compared to direct culture method after KOH treatment and KOH treatment method after cold enrichment for better isolation ratio of according to comparision of Yersinia species, the detection ration (18.5%) of KOH treatment method after cold enrichment was about 3 times better than that (6.1%) of direct culture method after KOH treatment. According to serotypes of Y. enterocolitica isolates, O : 5 (12.9%) was the most predominant and followed by O : 3 (9.7%), O : 8 (6.5%) and O : 9 (3.2%), and others. For biotypes of Y. enterocolitica isolates, 1A (71.0%) was the most predominantly abundant and followed by 3A (12.9%), 3B (9.7%), 1B (3.2%) and 5 (3.2%). Also, an antibiotic susceptibility test showed that Yersinia spp. isolates were very susceptible to the antibiotics tested, but they were very strongly resistant to ampicillin, cephalothin and carbenicillin.
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국내 식품으로부터 분리한 Listeria Species의 RAPD 분석
최영춘(Young-Chun Choi),박부길(Boo-Kil Park),이택수(Tex-Soo Lee),오덕환(Deog-Hwan Oh) 한국식품영양과학회 2000 한국식품영양과학회지 Vol.29 No.4
Randomly Amplified Polymorphic DNA(RAPD) 기술을 이용하여 국내 식품으로부터 분리한 Listeria sp. 분리균주에 대한 DNA polymorphism을 분석하고 유연관계를 비교하며, 유용 marker를 개발할 목적으로 10가지 10-mer primer를 이용하여 PCR을 수행한 결과 5개의 primer(OPA-01, OP-26-01, OP-26-02, OPB-01, OP-26-10)가 선별되었고, 76개의 DNA 단편이 증폭되었다. 이 중 OPA-01과 OP-26-10 primer에 의한 약 1.5 kb와 0.7 kb의 증폭 band는 모든 Listeria 분리균에서 관찰할 수 있었으나, 이 증폭된 DNA 단편은 Listeria sp.에만 특이적인 것은 아니었다. NTSYS 프로그램을 이용해서 Listeria sp. 분리균간의 유전적 유연관계를 알아본 결과 7개의 cluster로 나뉘어졌고 유사도는 대체로 0.54~0.93사이었으며, 특히, No.3과 No. 20은 93%로 가장 높은 유사도를 나타내었고, No. 7과 No. 24 또는 No. 7과 No. 45는 54%로 가장 낮은 유사도를 나타내었다. 이러한 결과는 RAPD 기술을 이용하여 쉽게 Listeria sp.를 subspecies로 분류할 수 있음을 시사하였다. This study was carried out for comparing Listeria strains developing genetic markers for Listeria strains using Listeria sp. genetic markers using Randomly Amplified Polymorphic DNA (RAPD) analysis method. Five of 10 RAPD primers (OPA-01, OP-26-01, OP-26-02, OPB-01, OP-26-10) showed the distinctive polymorphism among Listeria sp. isolated from domestic foods. RAPD-PCR with five arbitrary primers produced 76 DNA polymorphism. Among them, OPA-01 and OP-26-10 primers produced about 1.5 kb and 0.7 kb amplified DNA fragments for all the Listeria sp., but these amplified DNA fragment did not correspond to specific Listeria genus. The genetic relationships of Listeria sp. using NTSYS program were grouped into 7 clusters and showed 0.54 to 0.93 similarity among strains. Especially, No. 3 and No. 20 isolates showed genetically most similar relationship by 0.94, and No. 7 and No. 24, or No. 7 and No. 45 isolates showed the least similarity by 0.54. From these results, RAPD analysis method seemed to be successfully applied the classification and genetic analysis for Listeria sp. isolates.
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