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        사람 혈소판에서 분리한 Transforming Growth Factor - β가 초회 배양된 Mesangial 세포의 복제 및 Collagen 합성에 미치는 영향

        조성우,박수길,김금이,이희봉,이재담 ( Sung Woo Cho,Su Kil Park,Geum Yi Kim,Hee Bong Lee,Jae Dam Lee ) 생화학분자생물학회 1992 BMB Reports Vol.25 No.3

        The effect of TGF-β on cell replication and collagen synthesis in primarily cultured mesangial cells from rats was studied in vitro. The TGF-β was purified from human platelets by acidic ethanol extraction and gel filtration with FPLC. The effect of TGF-β on the DNA synthesis and the collagen synthesis in mesangial cells depended on both TGF-β concentration and cell density in monolayer culture. Concentrations of TGF-β ranging from 0.1∼15 ng/ml were evaluated for their effects upon DNA synthesis. In confluent cells, when compared to the growth rate in standard medium, TGF-β concentrations in the range 0.1∼15 ng/ml reduced a cell proliferation up to 35%, suggesting inhibition of cell division. The effect of TGF-β on collagen synthesis in mesangial cells was biphasic. In confluent cells, the addition of TGF-β induced a 2-fold increase in the production of collagen when compared with cells grown in standard medium. The maximal effect of TGF-β occurred at 0.5 ng/ml. At higher concentrations there was a decrease in the action of TGF-β with the effects on collagen production. In subconfluent cells, however, TGF-β showed no significant effects on the DNA synthesis and the collagen synthesis at all concentrations. These results support that TGF-β may play an important role as a multifunctional regulator in the pathogenesis of glomerulosclerosis. v

      • Effects of Human Platelet Transforming Growth Factor-$\beta$ on Replication and Collagen Synthesis in Primarily Cultured Mesangial Cell

        조성우,박수길,김금이,이희봉,이재담,Cho, Sung-Woo,Park, Su-Kil,Kim, Geum-Yi,Lee, Hee-Bong,Lee, Jae-Dam 생화학분자생물학회 1992 한국생화학회지 Vol.25 No.3

        쥐의 mesangial 세포를 초회 배양하여 Transforming Growth Factor-$\beta$(TGF-$\beta$)가 세포의 복제 및 collagen 합성에 미치는 영향을 조사하였다. TGF-$\beta$는 사람 혈소판에서 산성 에탄올 침전법 및 FPLC를 이용한 젤 크로마토그래피의 방법으로 정제되었다. TGF-$\beta$가 mesangial 세포를 복제 및 collagen 합성에 미치는 영향은 TGF-$\beta$ 농도와 세포의 밀도에 따라 달라졌다. Confluent 세포의 경우 0.1~15 ng/ml의 농도에서 TGF-$\beta$는 mesangial 세포의 복제를 35%까지 감소시켰다. Collagen 합성은 0.5 ng/ml의 TGF-$\beta$ 농도에서는 2배로 증가되었으나 그 이상의 농도에서는 감소하기 시작하는 두 가지의 조절 양상을 보였다. 그러나 subconfluent 세포의 경우에는 세포의 복제 빛 collagen 합성 모두에 TGF-$\beta$는 아무런 효과를 나타내지 못하였다. 본 연구결과는 TGF-$\beta$가 glomerulosclerosis에 있어서 중요한 역할을 하리라는 가능성을 제시해주고 있다. The effect of TGF-$\beta$ on cell replication and collagen synthesis in primarily cultured mesangial cells from rats was studied in vitro. The TGF-$\beta$ was purified from human platelets by acidic ethanol extraction and gel filtration with FPLC. The effect of TGF-$\beta$ on the DNA synthesis and the collagen synthesis in mesangial cells depended on both TGF-$\beta$ concentration and cell density in monolayer culture. Concentrations of TGF-$\beta$ ranging from 0.1~15 ng/ml were evaluated for their effects upon DNA synthesis. In confluent cells, when compared to the growth rate in standard medium, TGF-$\beta$ concentrations in the range 0.1~15 ng/ml reduced a cell proliferation up to 35%, suggesting inhibition of cell division. The effect of TGF-$\beta$ on collagen synthesis in mesangial cells was biphasic. In confluent cells, the addition of TGF-$\beta$ induced a 2-fold increase in the production of collagen when compared with cells grown in standard medium. The maximal effect of TGF-$\beta$ occurred at 0.5 ng/ml. At higher concentrations there was a decrease in the action of TGF-$\beta$ with the effects on collagen production. In subconfluent cells, however, TGF-$\beta$ showed no significant effects on the DNA synthesis and the collagen synthesis at all concentrations. These results support that TGF-$\beta$ may play an important role as a multifunctional regulator in the pathogenesis of glomerulosclerosis.

      • KCI등재
      • Mechanism and Thermodynamics of Interaction of Thymidylate Synthase with 5-Fluoro-2'-deoxyuridylate

        Cho, Sung-Woo,Hwnag, Onyou,Song, Kyuyoung,Lee, Jae Dam,Na, Doesun 울산대학교 의과대학 1993 울산의대학술지 Vol.2 No.2

        본 논문에서는 항암제로서 널리 쓰이는 5-fluoro-2'-deoxyuridylate(FdUMP)와 그 target이 되는 thymidylate synthase(TS)의 상호작용의 기전을 열역학적인 방법을 이용하여 연구하였다. 이들의 작용은 우선 비공유결합 상태의 복합체를 이룬뒤 다시 공유결합적 형태를 이루는 단계를 거치는데 이때의 전환속도는 25℃에서 0.6s??이었다. 또한 이때 비공유결합 상태의 복합체에서 CH₂H₄folate가 떨어져 나가는 유리 상수의 크기는 1uM이었다. 공유결합적 형태를 이루는데 쓰이는 열역학적 변수들은 각각 활성화 에너지 변화가 20kcal/mol, 자유 에너지 변화가 17.9kcal/mol, 엔탈피 변화가 19.3kcal/mol, 그리고 엔트로피 변화가 0.005kcal/mol/deg 였다. 비공유결합 상태의 복합체와 공유결합적 형태 사이의 평형상수는 2×10?이었으며 공유결합 상태의 복합체에서 CH?H?folate가 떨어져 나가는 최종 유리 상수의 크기는 10?M이었다. 이상의 결과 및 UV difference spectrum의 결과로 미루어 볼때 CH₂H₄folate 결합에너지의 일부가 5-iminium ion 중간물질의 형성에 쓰이고 있으며, 이러한 5-iminium ion 중간 물질의 형성 반응은 CH₂H₄folate의 N-10 위치에서의 general-acid catalysis및 비공유결합 상태의 TS-FdUMP-CH₂H₄folate 복합체내의 특정 부위의 변화에 의해서 촉진되어지는 것으로 추정된다.

      • Purification and Determination of in vitro and in vivo Activities of Recombinant Human Annexin Ⅰ

        Kim,Chong-Kook,Cho,Sung-Woo,Hwang,On-you,Lee,Jae-Dam,Song,Kyu-young,Kim,Kyoung-Mi,Lee,Jong-Wook,Na,Doe-Sun 울산대학교 의과대학 1993 울산의대학술지 Vol.2 No.1

        아넥신 Ⅰ은 칼슘의존적으로 인지질막에 결합하는 단백질군의 하나인 아넥신류에 속하며 상피성 성장 인자 수용체 키나제의 기질로 알려져있다. 그러나, 생체내 역할과 그 기전에 대하여는 밝혀지지 않고 있다. 아넥신Ⅰ의 생물학적 기능에 대한 자세한 연구를 하기위해 재조합 아넥신Ⅰ을 수용성 상태로 생산하였고, 대장균에서부터 EGTA추출한 후, DE-52 이온 교환, gel filtration, hydroxylapatite 칼럼을 통과시켜 대량으로 정제하였다. 정제된 아넥신Ⅰ은 시험관내에서 PLA를 억제하였고, 생체내에서 쥐 발바닥 부종에 대한 소염 효과를 나타내었다.

      • Regulation of Catecholamine Secretion and Synthesis by Histamine in Primary Cultured Bovine Chromaffin Cells

        Hwang, Onyou,Na, Doesun,Song, Kyuyoung,Cho, Sung-Woo,Lee, Jae Dam 울산대학교 의과대학 1992 울산의대학술지 Vol.1 No.1

        Histamine은 부신 수질 세포의 H₁수용체 활성화를 통한 phosphatidylinositide 가수 분해와 함께 catecholamine 유리를 촉진시킨다고 알려진 바 있다. 본 논문에서는 histamine의 세포 내 작용 기전을 밝히고자 histamine이 catecholamine 생합성 효소인 phenylenolamine N-methytransferase(PNMT)의 유전자 발현 및 catecholamine유리에 미치는 영향을 연구하였다. Histamine에 의한 catecholamine유리는 세포 외 calcium 유입에 의존적이었으나, 세포 내 저장 calcium과는 무관하였고, reserpine 및 탈분극에 의한 유리와 비슷한 수준이었다. Protein kinase C(PKC) 활성제 TPA에 의한 유리와 구별 될 수 없었으며, 그 억제제인 staurosporin에 의해 억제되었다. 또한, histamine은 PNMT mRNA를 증가시켰는데, 이 현상은 TPA에 의한 증가와 동일하며, dantrolene에 의한 차이는 없었으나, PKC 억제제인 sphingosine에 의해 억제되었다. 이상의 결과는 histamine이 chromaffin세포에서 PKC활성화를 통하여 catecholamine 유리 및 PNMT 유전자 발현의 증가시킴으로 catecholamine의 유리와 합성을 연결시킴을 시사하였다.

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