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톳 열수추출물로부터 분리한 혈액 항응고성 다당류에 관한 연구
김경임(Kyung-Im Kim),서혜덕(Hae-Duk Seo),이현순(Hyun-Sun Lee),조홍연(Hong-Yeon Jo),양한철(Han-Chul Yang) 한국식품영양과학회 1999 한국식품영양과학회지 Vol.27 No.6
국내산 해조류로부터 항혈전 제제의 개발을 위하여 해조류 열수추출물에 대하여 항응고 활성의 검색과정에서 높은 활성을 보였던 톳(Hizikia fusiforme)에서 항응고 활성 다당류를 분리, 정제하고 이 다당류의 화학적 특성과 항응고 활성 기작을 조사하였다. 분리, 정제는 톳(Hizikia fusiforme)의 열수추출물(HF-0)을 ethanol 농도별 침전을 실시한 결과 70% ethanol 온도에서 침전한 HF-2 획분이 가장 활성이 높았다. HF-2를 pronase와 periodate를 이용하여 단백질과 탄수화물을 선택 분해하여 활성을 비교한 결과 활성의 본체는 다당이었다. DEAE-Toyopearl 650C(Cl form)의 이온교환 크로마토그래프를 실시하여 5개의 획분으로 나누었으며 1.0M의 NaCl 농도에서 용출된 HF-2-3 획분이 가장 활성이 높았다. HF-2-3 획분을 Sephadex G-75(HF-2-3-1)와 Sepharose CL-6B(HF-2-3-1a)로 겔여과 크로마토그래피를 실시하여 최종적으로 정제된 다당류 HF-2-3-1a 획분을 얻어 그 순도를 GPC와 HPLC를 이용하여 확인하였다. 정제다당(HF-2-3-1a)의 분자량은 5.3×10^5 Da이었으며 주구성당은 fucose(51.92%), galactose(19.34%), mannose(13.92%), xylose(7.14%), arabinose(3.95%) 및 rhamnose(3.78%) 등으로 정제된 다당은 29.7%의 황산기를 함유하는 함황성 fucoidan이었다. HF-2-3-1a의 항응고 활성은 내인성 경로를 억제하며 fibrin 형성능을 측정한 결과 직접적으로 thrombin에 작용하지는 못하고 antithrombin Ⅲ의 활성을 증폭시켜 항응고 활성을 나타내며 농도 의존성 항응고 활성을 나타내었다. 톳 열수 추출물의 항응고 활성을 in vivo에서 측정한 결과 100㎎/㎏의 농도에서부터 활성이 나타나기 시작하여 250㎎/㎏의 농도에서는 100%의 항응고 활성이 나다났다. This study was focused on the purification, characterization and promotion mode of an anticoagulant polysaccharide from Hizikia fusiforme. The anticoagulant crude polysaccharide(HF-0) was obtained by using hot water extraction at 100℃ for 3 hrs after homogenizing desalted Hizikia fusiforme. The anticoagulant polysaccharide(HF-2-3-1a) was purified from the crude extract(HF-0) through stepwise gradient ethanol precipitation(HF-2), DEAE-Toyopearl 650C(HF-2-3), Sephadex G-75(HF-2-3-1), Sepharose CL-6B(HF-2-3-1a) chromatography and HPLC to homogeneity. HF-2-3-1a was estimated at 5.3×10^5 Da molecular weight and composed of fucose(51.92%), galactose(19.34%), mannose(13.92%), xylose(7.14%), arabinose(3.95%) and rhamnose(3.78%), and comprimised 29.7% sulfate residue. The sulfated anticoagulant polysaccharide from HF-2-3-1a was proposed to inhibit via the intrinsic pathway and common pathway in the blood coagulation. The HF-2-3-1a exhibited the anticoagulant activity by activating an antithrombin Ⅲ and the activity depended on the concentration of HF-2-3-1a. Acute toxicity of HF-2 in mice was not detected. Only 14 of 33 control mice(11.4%) that had taken saline survived for 30 min after injecting thrombin(100 NIH unit/ml).
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