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- 저자 : 변혜정 ( Hae-jung Byun ) (검색결과 3 건)
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새로운 신경전달물질 H₂S 발생 효소, cystathionine γ-lyase의 대량발현 조건과 활성측정
Kyoung-Ran Kim(김경란),Hae-Jung Byun(변혜정),Hyun-Nam Cho(조현남),Jung-Hyun Kim(김정현),Seun-Ah Yang(양선아),Kwang-Hwan Jhee(지광환) 한국생명과학회 2011 생명과학회지 Vol.21 No.1
질병과 밀접한 관계가 있는 hCGL 단백질의 경우 대량 배양 시 유도체를 사용하지 않아도 발현이 되는 점과 유전자 측면에서 조작이 쉬운 E.coli를 이용하여도 발현이 된다는 점에 있어서 중요한 이점을 가지고 있다. 본 연구에서는 배양되는 온도와 발현에 관련 있는 유도체의 농도, 600 ㎚에서의 균 성장 정도에 따른 유도체의 첨가 그리고 배지의 양을 조절하면서 유입되는 aeration의 조건으로 hCGL 단백질 발현의 최적의 조건 확립을 목적으로 하였다. 또 각 발생되는 inclusion body의 양을 측정하면서 보다 많은 가용성 단백질을 발현시키는 조건을 확립하고자 하였다. hCGL 단백질은 저온에서 보다 많은 양의 단백질이 발현되며 inhibitor의 억제를 담당하는 유도체의 농도와는 상관없이 발현이 되었다. 또한 균의 성장 정도에 따라 유도체의 첨가시기를 달리 하였을 때, 발현 비율에 차이는 있었으나 전체적인 단백질 양과 비교해 보면, 이는 hCGL 발현에 큰 영향을 미치지 않는다. 배지의 양을 달리하여 살펴본 aeration에 따른 hCGL 발현 정도는 배지의 부피가 15%일 때 높은 aeration으로 균의 양은 많았으나 목적 단백질인 hCGL의 발현은 aeration이 되지 않는 조건에서 더 잘되는 것을 확인하였다. 그리고 His-TEV-hCGL의 활성은 야생형 hCGL의 활성을 기준으로 하였을 때, L-cystathionine을 기질로 하였을 경우 76%, L-cysteine을 기질로 하였을 경우 88% 수준으로 유사한 활성을 나타내었고, 이는 손쉽게 정제 가능한 His-TEV-hCGL을 야생형을 대신하여 사용할 수 있음을 시사한다. 또한 His-TEV-hCGL이 야생형 hCGL과 같이, 427 ㎚에서 흡광을 가지는 것으로 보아 보효소PLP를 포함하고 있음을 알 수 있었다. 이로써 homocysteine 대사연구에 필수적인 hCGL 효소를 다량 얻는 방법을 확립하고, 관련 연구에 기여하리라 사료된다. There is a growing recognition of the significance of H2S as a biological signaling molecule involved in vascular and nervous system functions. In mammals, two enzymes in the transsulfuration pathway, cystathionine β-synthase (CBS) and cystathionine γ-lyase (CGL), are believed to be chiefly responsible for H₂S biogenesis. Genetic inborn error of CGL leads to human genetic disease, cystathioninuria, by accumulating cystathionine in the body. This disease is secondarily associated with a wide range of diseases including diabetes insipidus and Down's syndrome. Although the human CGL (hCGL) overexpression is essential for the investigation of its function, structure, reaction specificity, substrate specificity, and protein-protein interactions, there is no clear report concerning optimum overexpression conditions. In this study, we report a detailed analysis of the overexpression conditions of the hCGL using a bacterial system. Maximum overexpression was obtained in conditions of low culture temperature after inducer addition, performing low aeration during overexpression, and using a low concentration inducer (0.1 mM, IPTG) for induction. Expressed hCGL was purified by His-tag affinity column chromatography and confirmed by Western blot using hCGL antibody and enzyme activity analysis. We also report that the His tag with TEV site attached protein exhibits 76% activity for α-γ elimination reaction with L-cystathionine and 88% for α-β elimination reaction with L-cysteine compared to those of wild type hCGL, respectively. His tag with TEV site attached protein also exhibits a 420 ㎚ absorption maximum, which is attributed to the binding cofactor, pyridoxal 5’-phosphate (PLP).
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유동찬 ( Dong-chan Yoo ),조현남 ( Hyun-nam Cho ),김경란 ( Kyoung-ran Kim ),변혜정 ( Hae-jung Byun ),김정현 ( Jung-hyun Kim ),박혜빈 ( Hye-bin Park ),김희준 ( Hee-joon Kim ),방대석 ( Dae-suk Bang ),양선아 ( Seun-ah Yang ),강공원 ( 대한화장품학회 2011 대한화장품학회지 Vol.37 No.4
약용식물은 피부와 모발을 보호하는 잠재적 기능을 가지고 있다고 알려져 있다. 약용식물의 유용 성분들은 대부분 비수용성 약용성분들이므로 수용성 분자 담지체인 β-cyclodextrin을 이용하여 초분자 복합체를 형성시켜 기능성의 변화를 살펴보았다. 약용식물의 유용 성분이 함유된 크림, 샴푸, 바디워시, 그리고 헤어토닉은 계면활성제, 방향제, 약용식물 추출물과 β-cyclodextrin을 혼합하여 제조하였다. 복합체를 함유한 샴푸 및 바디워시에서 그람 양성균들과 비듬균으로 알려져 있는 효모에 대한 항균활성과 균 성장억제 효과를 확인하였다. HDF (human dermal fibroblast)에 대한 초분자체의 독성실험결과, 초분자체의 함량이 1 mg/mL 이하의 경우에서는 세포 독성이 나타나지 않았다. 본 연구결과는 약용식물 추출물과 약용성분 초분자 복합체에 대한 세포무독성을 확인하고 항균활성을 확인함으로써 향후 기능성 화장품 제조 시 안정성과 기능성의 과학적 근거를 확보하였다고 사료된다. In this report, we have investigated the functional properties change of phytochemicals by the encapsula-tion using water soluble host, β-cyclodextrin. The cream, shampoo, bodywash, and hair tonic containing phytochem-ical supramolecules were produced by mixing the surfactants, fragrances and the oriental herbal extracts encapsulated with β-cyclodextrin. Shampoo and bodywash including the encapsulated phytochemicals exhibited anti-growth ac-tivity against Gram (+) and Malassezia furfur which is known to cause dandruff. In cytotoxicity test against HDF (human dermal fibroblast), we could not detect any toxicity when the supramolecules content was less than 1 mg/mL. Our results suggest that the supramolecule of β-cyclodextrin with phytochemicals could be a safe anti-bac-terial agent for cosmeceuticals.
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식물성 유용물질을 함유하는 초분자체 화장제재의 콜라겐 증가 및 육모효과
조현남 ( Hyun-nam Cho ),유동찬 ( Dong-chan Yoo ),김경란 ( Kyoung-ran Kim ),변혜정 ( Hae-jung Byun ),김정현 ( Jung-hyun Kim ),박혜빈 ( Hye-bin Park ),방대석 ( Dae-suk Bang ),양선아 ( Seun-ah Yang ),강공원 ( Gong-won Khang ),지광환 대한화장품학회 2012 대한화장품학회지 Vol.38 No.1
약용식물은 피부와 모발을 보호하는 잠재적 기능을 가지고 있다고 알려져 있다. 수용성 호스트 β-cyclodextrin 과 약용식물의 기능성 성분들과의 복합체 형성 시 나타나는 피부와 모발에 미치는 효과에 대하여 조사하였다. 기존의 연구에서 복합체 형성물의 무독성, 그리고 그람양성균과 비듬을 발생시키는 곰팡이에 대한 항균기능성을 확인하였다. 본 연구에서는 약용식물의 기능성 성분을 함유한 크림이 피부의 콜라젠 생성을 유도하여 피부의 생리활성을 증대시킴을 확인하였다. 또한 기능성 성분을 함유한 헤어토닉 처리군에서 육모의 성장이 증진되었음을 생쥐를 이용한 동물실험에서 확인하였다. 본 연구 결과, 비수용성 약용성분을 수용성 β-cyclodextrin에 포접시켜 초분자 복합체 형성을 통해, 육모기능의 향상과 피부노화지연 등 부가적 화장제재로의 개발가능성을 보여주었다. Medicinal herbs have been shown to have protective functions for skin and hair. We investigated the effects of complex of soluble β-cyclodextrin and phytochemicals on the functions of skin and hair. In previous report, we evaluated the safety of supramolecules and found their anti-microbial effects and anti-fungal effect against Gram (+) and Malassezia furfur which is known to cause dandruff. Here we present that functional supramolecules-containing cream promotes the biological skin activity by inducing the collagen formation. And treatment of supramolecules-containing hair tonic increased the rate of hair growth of mouse. Taken together, supramolecular cosmetic compounds containing water insoluble phytochemicals and water soluble β-cyclodextrin exhibit the potential ability for hair growth promotion and delaying the aging of skin.
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