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<논문(論文)> : 누에 후부실샘 특이 발현 유전자 클로닝
박옥란 ( Yulan Piao ),김성렬 ( Seong Ryul Kim ),김성완 ( Sung Wan Kim ),강석우 ( Seok Woo Kang ),구태원 ( Tae Won Goo ),최광호 ( Kwang Ho Choi ) 한국잠사학회 2015 한국잠사곤충학회지 Vol.53 No.1
본 연구는 누에 후부실샘에서 특이적으로 발현하는 새로운 전사체를 탐색하고 이의 프로모터 영역을 분석함으로서 향후 형질전환누에 제작용 전이벡터 시스템의 효율성 제고를 위해 활용하고자 하였다. 우선 새로운 후부실샘 특이 발현 전사체 선발을 위해 ACP-based dd-PCR 방법으로 후부실샘에서 특이적으로 발현하는 34개 PCR 증폭 산물이 선발되었는데, 이 중 지금까지 보고된 바 없는 새로운 전사체인 ACP-16(366 bp)이 선발되었다. Northern blotting hybridization 분석 결과, ACP-16은 후부실샘에서 특이적으로 발현되는 것이 확인되었으며 전사체 발현량에서는 fibroin light chain 보다는 적었으며 전사체 크기에서는 fibroin light chain 보다는 다소 큰 것으로 확인되었다. ACP-16 유전자 프로모터 영역을 클로닝 하기 위해 게놈 유전자은행으로부터 ACP-16 (366 bp)를 탐침으로 전체 17.4 kb 크기의 파이지 클론을 선발할 수 있었으며, 전 사체 상류에 유전자 발현조절에 필요한 TATA box와 Cap box 구조를 확인할 수 있었다. 본 연구에서 확보된 ACP-16 유전자의 프로모터 영역은 이후 코어 프로모터 개발연구를 통하여 효과적인 누에 형질전환 시스템 구축에 적용할 수 있을 것으로 기대된다. We characterized tissue specific-expressed genes in the posterior silk gland of Bombyx mori using by the Annealing Control Primer based differential display-PCR manner. In this study, we isolated 34 differentially expressed PCR amplicons, which one of these was identified as a novel transcript named as ACP-16 (366 bp), its expression was observed only in the posterior silk glands by Northern blot analysis. To determine promoter region of the ACP-16, we isolated and analyzed a phage DNA having 1.7 kb-long genome DNA including the open reading flame and 5’- upstream untranslated region of the ACP-16 gene from a genomic DNA library. We have estimated a promoter region of the ACP-16 gene by a web promoter prediction engine, which locates .750 ~ .165 from translation initiation site (ATG, +1). ACP-16 gene is necessary to more studies about critical biological role in order to apply the silkworm`s transgenic system.
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최광호 ( Kwang Ho Choi ),김성렬 ( Seong Ryul Kim ),강석우 ( Seok Woo Kang ),박옥란 ( Yulan Piao ),김성완 ( Sung Wan Kim ),김기영 ( Kee Young Kim ) 한국잠사학회 2015 한국잠사곤충학회지 Vol.53 No.2
본 실험에서는 누에 피브로인 L-chain 유전자의 인트론 영역을 사용하여 우리나라에서 보존하고 있는 누에 계통중 원산지별 누에 계통 8개를 대상으로 계통 간 유전자 다형성을 비교하였다. 실험 결과, 실험에 사용한 누에 계통에 따라서 동일한 계통 내 모든 개체에서 FibL1과 FibL2의 유전자다형성 조합이 일정하게 유지되어 있었으며, 계통 간에는 FibL1과 FibL2의 유전자 다형성 패턴 조합이 다소 상이한 것으로 확인되었다. 따라서, 프라이머 FibL1 와 FibL2에 의한 피브로인 L-chain 유전자 다형성 염기서열 정보를 활용한다면 제한된 영역에서 누에 계통 구분을 위한 지표로 활용할 수 있을 것으로 사료된다. We have previously characterized the complete fibroin light chain gene from one of the silkworm race Baegokjam (Bombyx mori) and found two variable regions (FibL1, intron 2 ~ 3; FibL2, intron 6) with the primer sets designed to cover these variable regions. In this study, we tested the utility of these variable regions as genetic markers for classifying silkworm races. For the purpose, Europian races (Q, PK), Chinese races (C26, C31), Japanese races (N15, N9), and tropical races (SA2, SA5) were used in this experiment. The polymorphism of the FibL1 and FibL2 were divided into two and three types, respectively. The combination of the FibL1 and FibL2 polymorphisms were constant within the same races. The result suggest that the primer sets designed from two variable regions of fibroin light chain gene may be useful as the genetic markers for silkworm races.
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