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- 저자 : 박승원 ( Seoung Won Park ) (검색결과 2 건)
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최광호 ( Kwang Ho Choi ),구태원 ( Tae Won Goo ),김성렬 ( Seong Ryul Kim ),김성완 ( Sung Wan Kim ),전재범 ( Jae Buhm Chun ),박승원 ( Seoung Won Park ),강석우 ( Seok Woo Kang ) 한국잠사학회 2013 한국잠사곤충학회지 Vol.51 No.2
This study was aimed for development of a useful genes that has a transcript expressional specificity in the early embryonic stage of the silkworm, Bombyx mori. We constructed and analyzed a full-length cDNA library from silkworm`s eggs which after a lapse of 2 ~ 6 hours post oviposit. A total 960 clones were randomly selected, and the 5` ends of the inserts were sequenced to generate 652 expressed sequence tags (EST). 334 unique ESTs were generated after the assembly of 652 ESTs. The annotation of 334 unique ESTs by BLAST search revealed that 156 (47%) of the sequences represented known genes, whereas 178 (53%) of the sequences has no matches in the database. Of the 156 known genes, the most abundant genes were heat shock protein hsp20.8 gene (12 times) and ubiqutin-like protein gene (11 times). The functional groups of these ESTs with matches in the database were constructed according to their putative molecular functions. Among thirteen functional categories, the largest groups were protein synthesis (9.6%) and cellular organization (8.1%). Further defined studies on molecular functions and biological roles of their promoters will give us well-fined information and its application.
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누에 견사선에서 분리한 RNA binding protein-1 유전자 프로모터 분석
최광호 ( Kwang Ho Choi ),김성렬 ( Seong Ryul Kim ),김성완 ( Sung Wan Kim ),구태원 ( Tae Won Goo ),강석우 ( Seok Woo Kang ),박승원 ( Seoung Won Park ) 한국잠사학회 2014 한국잠사곤충학회지 Vol.52 No.1
효율적인 형질전환 누에 시스템 구축을 위해서는 새로운 전이인자의 개발과 함께 선발을 위한 마커 유전자 및 transposase 발현을 효과적으로 조절할 수 있는 다양한 유전자 프로모터 개발이 필수적이다. 이와 관련하여 선행연구를 통해 누에 후부실샘으로부터 고발현하는 RNA binding protein-1 homologue(RBP-1) 유전자를 선발한 바 있다. 본 연구에서는 RBP-1유전자의 누에 발육시기별 및 유충 조직별 발현양상을 Northen blot hybridization 방법으로 분석한 결과, RBP-1 유전자는 유충기로부터 번데기 후기까지의 전기간에 걸쳐 발현하였으며, 두부, 표피, 중장, 지방체 및 견사선 등 실험한 모든 유충 조직에서 고발현하는 것으로 관찰되었다. 또한, 누에 게놈 유전자은행을 제작한 후 RBP-1 cDNA 유전자를 탐침으로 5``-UTR 영역을 클로닝하고 luciferase assay 방법으로 RBP-1 유전자 프로모터의 활성을 분석하였다. 실험 결과, RBP-1 cDNA를 탐침으로 RBP-1 유전자 ORF와 5’-UTR이 포함된 약 1,660 bp 영역의 게놈 유전자를 클로닝하였다. RBP-1 유전자 프로모터 활성검정을 위해 전사 개시점(+ 30)으로부터 상류의 -740 bp 영역을 PCR로 분리한 후 pGL3 basic vector에 도입하여 luciferase 활성 측정을 위한 전이벡터, pGL-RBP1를 제작하였다. 제작된 pGL-RBP1는 곤충 세포주(Sf9)에 transfection 한 후 luciferase 발현량을 측정한 결과, 기존의 BmA3 유전자 프로모터 대비 10% 가량 높은 발현 효율을 확인할 수 있었다. We isolated highly-expressed genes in the posterior silk glands of silkworm on a previously study, which one of these was identified as RNA binding protein-1 homologue (RBP-1) gene. In this study, we investigated gene expressional characteristics of the RBP-1 depending on silkworm development stages and several tissues of the larvae, respectively. Northern blot hybridization analysis showed that the RBP-1 gene was expressed high in larval and pupal periods, and highly expressed than endogenous internal control gene (BmA3) on all tested larval tissues. In addition, we isolated and analyzed a phage DNA having 1,660 bp-long promoter region of the RBP-1 gene from a genomic DNA library. To study the RBP-1 gene promoter activity, RBP-1 (?740/+ 30) was amplified by PCR and subcloned into a pGL3 basic vector to generate pGL-RBP1. A luciferase report vector carrying RBP-1 gene promoter (770 bp) was tested by luciferase assay in Sf9 cells. In the result, the RBP-1 gene promoter was more efficient than constitutive promoter (BmA3) by approximately ten percent.
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