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Flammulina elastica의 유전체 정보기반 신규 laccase 유전자 동정 및 구조 분석
유혜원,박영진,Yu, Hye-Won,Park, Young-Jin 한국버섯학회 2021 한국버섯학회지 Vol.19 No.1
최근 Flammulina 종들에 대한 유전체 염기서열 분석결과가 보고되었고, 그로 인해 다양한 유전자 정보가 밝혀지고 있다. 본 연구에서는 Flammulina elastica 전체 유전체 서열의 laccase 유전자를 동정하고 구조적 특징 분석을 수행하고자 하였다. 유전체 분석 및 생물정보분석을 통하여 F. elastica 유전체 내 3개의 laccase 유전자(Fe-lac1, Fe-lac2, Fe-lac3)를 확인하였고, 이들 유전자 내에는 10개의 히스티딘 잔기와 1개의 시스테인 잔기를 가지는 구리 이온 결합 영역과 4개의 시스테인 잔기를 가지는 이황화결합 형성 부위가 존재하는 것을 확인하였다. 1,548~1,602 bp의 laccase 유전자에 대한 전장 cDNA 염기서열 분석을 통하여 12~16개의 인트론이 존재하는 것을 확인되었으며, N-말단으로부터 17~22 bp의 사이에 신호펩타이드가 존재하는 것이 확인되었다. 본 연구를 통하여 F. elastica의 laccase 유전자를 최초로 동정하여 구조적 특징을 분석하였고, 이러한 결과는 F. elastica의 바이오매스 분해에 대한 이해를 돕는데 활용될 것으로 사료된다. The genome sequence of various Flammulina species has recently been reported, thereby revealing a diverse genetic repertoire. In this study, we identified laccase genes and analyzed their structural characteristics in Flammulina elastica (F. elastica) genome. Through genome analysis and bioinformatics approaches, three laccase genes (Fe-lac1, -lac2, and -lac3) were identified, ranging from 1,548 to 1,602 bp in length. These genes contained a copper ion-binding region with ten histidine residues and one cysteine residue and a disulfide bond-forming region with four cysteine residues. Full-length cDNA sequencing analysis revealed that laccase genes contain 12 to 16 introns and signal peptides between 17 and 22 bp in the N-terminus. Structural characterization of the laccase genes identified in this study should help in better understanding the biomass decomposition of F. elastica.
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Flammulina velutipes var. lupinicola의 유전체 정보기반 laccase 유전자 동정 및 특성 규명
유혜원,박영진,Yu, Hye-Won,Park, Young-Jin 한국버섯학회 2021 한국버섯학회지 Vol.19 No.4
본 연구에서는 Flammulina velutipes var. lupinicola의 laccase 유전자를 동정하고 최적 활성 pH, 온도, 시간을 분석하고 하였다. F. velutipes var. lupinicola 유전체에서 선별된 laccase 유전자 서열을 바탕으로 구리 결합 부위 및 신호 펩타이드 분석을 수행한 결과 5종의 laccase 유전자(g1934, g1937, g2415, g2539, g5858)를 동정하였다. 5종의 선별된 laccase 유전자 크기는 1,488~1,662 bp로 확인되었고, cDNA 염기서열 분석 결과 14~17개의 인트론이 확인되었다. Laccase 유전자의 신호펩타이드로 예측된 절단 부위는 N-말단으로부터 20~34 bp 사이에 위치하는 것으로 확인되었다. F. velutipes var. lupinicola laccase의 활성 특성을 규명하기 위해 분리 정제를 수행하였으며, Zymogram을 수행하여 0.2 M 및 0.3 M NaCl과 1.6 M 및 1.7 M의 ammonium sulfate로 정제된 단백질에서 5개의 laccsae 활성 밴드를 확인하였다. pH, 온도 및 시간별로 분리 정제된 단백질의 최적 활성을 분석한 결과, 반응의 최적 pH는 5.5이고 최적 온도는 40℃로 확인되었다. 따라서 본 연구를 통하여 확인된 F. velutipes var. lupinicola 유전체의 laccase 유전자 구조 및 활성에 대한 특성은 laccase를 이해하는 데 도움이 될 것이며 추가 연구를 통하여 향후 다양한 산업적 활용이 가능할 것으로 사료된다. The purpose of this study was to identify and characterize the laccase genes of Flammulina velutipes var. lupinicola. Five laccase genes (g1934, g1937, g2415, g2539, g5858) were selected based on the copper binding site and signal peptide analysis results using the laccase gene selected from the F. velutipes var. lupinicola genome. The size of the laccase genes of F. velutipes var. lupinicola were 1,488 bp~1,662 bp. As a result of cDNA sequence analysis, 14 to 17 introns were identified in the laccase genes. The cleavage site predicted as the signal peptide of the laccase gene was found to be located between 20 bp and 34 bp from the N-terminus. In addition, separation and purification were performed to characterize the F. velutipes var. lupinicola laccases, and the optimal activity of the separated and purified proteins were analyzed by pH, temperature and time. Five bands with laccase activity were found from zymogram analysis. The optimal pH of the reaction was 5.5, the optimal temperature was found to be 40℃. Therefore, characterization of the laccase genes identified in this study should help in better understanding the biomass decomposition of F. velutipes var. lupinicola.
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유혜원(Yoo, Hye-won),김유미(Kim, Yu-mi),김정녀(Kim Jeong-nyeo) 한국사회언어학회 2011 사회언어학 Vol.19 No.1
This study is aimed at suggesting the leaner-centered education methods in the formal speech education that is one of the liberal education in the university. It is important for learners to understand their style. Their own characters and style influence their speeches. So in order to show the various speech model, we analysed the women leaders’ speeches in Korea. These models help for learners to find their style and to improve their speech ability. As practices comprise a large portion of the speech education in the university, it is more important that learners prepare the speech and practice by themselves. Therefore, in this paper we present the 4 steps for speech practice. Through these steps, learners can understand their style, find their model, prepare speech and improve their speech ability. To find their model, the learners evaluate their characters, speech rate, tone, intonation, linguistic expression, gesture and face look. The method of learning suggested in this paper can help the learners overcome their fear and prepare the speech. Also, the college students that recognize the women leaders superficially will have an opportunity to aware women leaders in Korea at a new viewpoint.
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오배자, 우슬, 가자 및 감초를 포함하는 혼합추출물의 항산화 및 항균 활성
조홍석(Hong-Suk Cho),강세원(Se-won kang),김주희(Ju-Hee Kim),최민주(Min-Joo Choi),유혜원(Hye-Won Yu),박으뜸(Euteum Park),전홍성(Hong Sung Chun) 한국생물공학회 2014 KSBB Journal Vol.29 No.1
In this study, antioxidant and antimicrobial activities of ethanolic crude extract and its five different solvent subfractions (namely, ethyl acetate fraction, n-butanol fraction, chloroform fraction, n-hexane fraction and the aqueous fraction) from a mixture of four different medicinal herbs (Galla rhois, Achyranthes japonica Nakai, Terminalia chebula Retz and Glycyrrhiza uralensis) were investigated. Among all the tested mixture combination of four medicinal herbs, 5:3:1:1 ratio of Galla:Achyranthes : Terminalia : Glycyrrhiza had the best antimicrobial effects against four strains of microorganisms (Staphylococcus aureus, Staphylococcus epidermidis, Pseudomonas aeruginosa and Escherichia coli) and exhibited the highest DPPH radical-scavenging activity. Further sub-fractions with solvents were screened for antioxidant and antimicrobial activities. Antioxidant activity in order was ethyl acetate fraction > n-butanol fraction > chloroform fraction > nhexane fraction > aqueous fraction. The n-butanol extracted fraction showed the highest level of antimicrobial activity in com- parison to other fractions. In addition, all those fractions did not show any cytotoxicity against human skin cell CCD-986sk. These results suggest that 5:3:1:1 combination extracts of medicinal herbs (Galla : Achyranthes : Terminalia : Glycyrrhiza) may be potentially used as a safe natural antimicrobial preservative.
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