GPCR 냉동보관 세포의 활용을 위한 냉동조건의 최적화 연구

노효진(Noh, Hyojin),이승호(Lee, Sung-Hou) 한국산학기술학회 2015 한국산학기술학회논문지 Vol.16 No.2

신약 개발의 주요 표적이 되는 G-protein coupled receptor (GPCR)은 대부분의 생리적 활동에 관여하며 다양한 질병 과 질환들에 관련되어 있다. GPCR을 타겟으로 하는 의약개발 연구에서 필수적인 실험방법으로 많이 활용되고 있는 세포기 반 스크리닝 기술들은 사용되는 세포의 상태에 따라 데이터의 질이 좌우되는데 최근, 실험에 사용할 세포를 매번 배양하면서 소모되는 비용과 데이터의 변동을 줄이기 위해 냉동보관 세포를 적용하는 추세이다. 이에 본 연구에서는 단일 세포를 많은 양으로 배양하고 냉동 보관한 다음 사용되는 세포의 반응을 최적화하기 위하여 칼슘 검출을 위한 광 단백질이 포함된 세포주 에 calcium sensing receptor와 urotensin Ⅱ receptor가 안정적으로 발현되는 안정화 세포를 제작하고 ?80°C에서 보관한 다음 7 일 간격으로 실험했을 때 효능제와 길항제 반응을 비교하였다. 실험결과 보관기간이 증가함에 따라 세포 신호 값이 감소하였지만 EC50와 IC50 값의 변화는 나타나지 않았다(EC50:3.46±1.36 mM, IC50:0.49±0.15 μM). 그러나 액체질소에서 보관 한 세포의 경우에서는 비냉동 세포와 비교하여 세포 신호 값이 감소했지만 보존기간에 따른 변화가 나타나지 않았으며 기간 에 따른 EC50와 IC50의 변화도 없었다. 보관기간이 경과 될수록 세포의 신호 값이 감소하는 것은 세포 손상도 증가가 원인인 것으로 판단되며, 이러한 결과들로부터 장기간 냉동 보관을 위해서는 액체질소를 이용하는 것이 가장 효과적이고 한 달 이내 단기간 사용의 목적으로는 ?80°C 보관조건도 가능할 것으로 판단된다. 이와 같이 냉동세포의 적극적인 활용을 통하여 초기 스크리닝 과정에서 나타나는 실험 유동성을 감소시킬 수 있을 것으로 예상된다. The major target for drug discovery, G-protein coupled receptor (GPCR) is involved in many physiological activities and related to various diseases and disorders. Among experimental techniques relating to the GPCR drug discovery process, various cell-based screening methods are influenced by cell conditions used in the overall process. Recently, the utilization of frozen cells is suggested in terms of reducing data variation and cost-effectiveness. The aim of this study is to evaluate various conditions in cell freezing such as temperature conditions and storage terms. The stable cell lines for calcium sensing receptor and urotensin receptor were established followed by storing cultured cells at ?80°C up to 4 weeks. To compare with cell stored at liquid nitrogen, agonist and antagonist responses were recorded based on the luminescence detection by the calcium induced photoprotein activation. Cell signals were reduced as the storage period was increased without the changes in EC50 and IC50 values (EC50:3.46±1.36 mM, IC50:0.49±0.15 μM). In case of cells stored in liquid nitrogen, cell responses were decreased comparing to those in live cells, however changes by storage periods and significant variations of EC50/IC50 values were not detected. The decrease of cell signals in various frozen cells may be due to the increase of cell damages. From these results, the best way for a long-term cryopreservation is the use of liquid nitrogen condition, and for the purpose of short-term storage within a month, ?80°C storage condition can be possible to adopt. As a conclusion, the active implementation of frozen cells may contribute to decrease variations of experimental data during the initial cell-based screening process.

CRF1 길항제 스크리닝을 위한 에쿼린 기반 세포실험 개발연구

노효진(Noh, Hyojin),이승호(Lee, Sung-Hou) 한국산학기술학회 2015 한국산학기술학회논문지 Vol.16 No.11

corticotropin releasing factor(CRF)는 스트레스에 의해 유도되는 신경펩타이드 물질들 중 하나로서 모발의 손실 및 재성장에 영향을 미친다고 광범위하게 제기되어 왔다. 이에 CRF1 수용체 길항제 개발을 위하여 세포 내 칼슘 신호전달 기전 을 이용한 스크리닝 시스템을 개발하고 최적화 연구를 수행하고자 하였다. 이를 위하여 에쿼린 모체세포에 CRF1 수용체와 만능 G 단백질인 Gα16 유전자를 동시에 발현시켜 안정화 세포주를 구축하였다(HEK293a16/hCRF1). 표준 효현제인 sauvagine 의 반응이 임시 발현세포와 비교하여 안정화 세포주에서 농도 의존적 반응 범위가 12배 이상 증가하였으며(EC50:15.21±1.83 nM), 이에 따라 길항제 스크리닝에 필수적인 안정적인 신호와 높은 용매 허용도를 확보할 수 있었다. CRF1 수용체에 대한 표준 길항제인 antalarmin과 CP154526에 대한 IC50 수치는 각각 414.1±5.5와 290.7±1.9 nM로 확인되었는데 냉동보관세포의 경우에도 유사한 결과를 얻었다. 에쿼린 기반 세포 기능실험의 최적화 연구를 통해 구축된 CRF 수용체 안정화 세포주는 모발 의 재형성과 관련된 신규의 기능성 화장품 및 조절물질 개발 연구에 적극적으로 활용 가능 할 것으로 판단된다. Corticotropin-releasing factor(CRF), one of the stress driven neuropeptides, was widely proposed to influence hair loss and re-growth. For the development of receptor antagonists, the screening system based on intracellular calcium signal process was developed and optimized. The aequorin parental cells were transfected with CRF1 receptor and alpha 16 promiscuous G protein cDNA to establish HEK293a16/hCRF1, a stable cell line for the human CRF1 receptor. In HEK293a16/hCRF1 cells, the range of sauvagine dose response was 12-fold higher(EC50:15.21±1.83 nM) than in the transiently expressed cells, hence essential conditions for the antagonist screening experiments such as the robust signals and high solvent tolerance were secured. The standard antagonists for the CRF1 receptor, antalarmin and CP154526, resulted IC50 values of 414.1±5.5 and 290.7±1.9 nM, respectively. Similar results were presented with frozen HEK293a16/hCRF1 cells. Finally, our HEK293a16/hCRF1 cells with the aequorin based cellular functional assay can be a model system for the development of functional cosmetics and modulators that can have a clinical efficacy on hair re-growth.

Functional group effects on a metal-organic framework catalyst for CO₂ cycloaddition

Noh, Jinmi,Kim, Youngik,Park, Hyojin,Lee, Jihyun,Yoon, Minyoung,Park, Myung Hwan,Kim, Youngjo,Kim, Min THE KOREAN SOCIETY OF INDUSTRIAL AND ENGINEERING 2018 JOURNAL OF INDUSTRIAL AND ENGINEERING CHEMISTRY -S Vol.64 No.-

<P><B>Abstract</B></P> <P>A variety of metal-organic frameworks (MOFs) have been reported as efficient catalysts for CO<SUB>2</SUB> fixation reactions, such as cycloaddition to cyclic carbonates. The permanent porosity of the frameworks and the Lewis acidity of the MOF metal sites have been considered as the major contributors to the catalytic activity in the cycloaddition of CO<SUB>2</SUB>. In this study, we have, instead, focused on the effects of the organic functional groups for effective catalytic ability. A total of eight different functionalized Zr-based MOFs were tested. It was revealed that the non-functionalized pristine UiO-66 MOF (UiO=University of Oslo) showed the best conversion at low temperature (77% at 50°C), whereas the hydroxy-functionalized UiO-66-OH MOF displayed the best conversion at high temperature (91% at 140°C). The Zr-MOF could be recycled up to four times without a significant decrease in the reactivity.</P> <P><B>Highlights</B></P> <P> <UL> <LI> The organic functional group effects on MOF-catalyzed CO<SUB>2</SUB> cycloaddition have been examined. </LI> <LI> Non-functionalized Zr-based MOF, UiO-66 showed the best catalytic activity at 50°C. </LI> <LI> The hydroxy-functionalized UiO-66-OH performed cyclic organic carbonate synthesis efficiently at 140°C. </LI> <LI> Various epoxides were successfully converted to cyclic organic carbonates, and the Zr-MOF catalyst could be recycled by simple centrifugation. </LI> </UL> </P> <P><B>Graphical abstract</B></P> <P>[DISPLAY OMISSION]</P>

Difference in the relative response of alanine dosimeters to Linac and CyberKnife

HyoJin Kim,Hyun Kim,Sung Jin Noh,Yeong-Rok Kang 대한방사선방어학회 2018 대한방사선방어학회 학술발표회 논문요약집 Vol.2018 No.11

Trace Element Analysis of Cesium Concentration in Marine Microalga Tetraselmis sueica by Photon Activation Analysis

HyoJin Kim,Hyun Kim,Sung Jin Noh,Kyoung Won Jang,Tae Gen Son,Yeong-Rok Kang 대한방사선방어학회 2018 대한방사선방어학회 학술발표회 논문요약집 Vol.2018 No.04

Measurement of isomeric yield ratios in the photo-production of ^{133m,g;137m,g}Ce from ^natCe using 55-, 60-, and 65-MeV bremsstrahlung

Kim, HyoJin,Noh, Sung Jin,Kang, Yeong-Rok,Lee, Manwoo,Jeong, Dong Hyeok,Kim, Jung Ki,Yang, Kwangmo,Ro, Tae-Ik,Shin, Sung Gyun,Kye, Yong Uk,Cho, Moo-Hyun,Kim, Guinyun Elsevier 2015 Nuclear instruments & methods in physics research. Vol.349 No.-

<P><B>Abstract</B></P> <P>The isomeric yield ratios of <SUP>133m,g</SUP>Ce and <SUP>137m,g</SUP>Ce produced from the <SUP>nat</SUP>Ce(γ,xn) reactions were determined by using the activation and the off-line γ-ray spectrometric technique with the end-point bremsstrahlung energies of 55-, 60-, and 65-MeV at 100-MeV electron linac of the Pohang accelerator laboratory. The induced activities in the irradiated foils were measured by using an energy- and efficiency-calibrated HPGe detector coupled to a PC based multi-channel analyzer. The necessary corrections were made to improve the accuracy of the experimental results. The experimental results at bremsstrahlung energies of 55-, 60-, and 65-MeV were 0.324±0.089, 0.331±0.086, and 0.403±0.089 for the <SUP>133m,g</SUP>Ce, and 0.210±0.062, 0.221±0.061, and 0.262±0.061 for the <SUP>137m,g</SUP>Ce, respectively. The present results for <SUP>nat</SUP>Ce(γ,xn)<SUP>133m,g;137m,g</SUP>Ce in this energy region were obtained for the first time which has no comparable literature data. The obtained isomeric yield ratios are compared with the calculated values based on the statistical model code TALYS 1.6.</P>

컨테이너 기반의 가상머신 시스템에서 메모리 자원 아이솔레이션을 위한 동적 메모리 사용량 측정 기법

김효진(Hyojin Kim),노삼혁(Sam H. Noh) 한국정보과학회 2007 한국정보과학회 학술발표논문집 Vol.34 No.1B

시스템 가상머신 환경은 높은 하드웨어 효율성과 높은 보안을 요구하는 시스템에서 그 사용이 점차 늘어나고 있다. 최근 많이 알려진 하이퍼바이저 가상머신 시스템은 높은 아이솔레이션과 보안성을 보장하나 각 게스트 운영체제 별로 운영체제 이미지를 가지기 때문에 하드웨어 효율성이 떨어지는 반면, 컨테이너 기반 가상머신 시스템은 운영체제 이미지의 공유로 인하여 높은 자원 효율성과 확장성을 가진다. 그러나 메모리 자원의 아이솔레이션에 대하여 취약점을 갖는 문제점을 안고 있다. 본 논문에서는 컨테이너 기반 가상머신 시스템에서 동적으로 각 가상머신별로 메모리 사용량 증가에 따른 페이지 히트율-곡선(Hit-Ratio-Curve)을 측정하였다. 이 곡선을 관찰해 보면 각 가상머신의 메모리 필요량을 알 수 있으며 이를 기반으로 메모리 자원을 할당하게 될 경우 효과적으로 메모리 자원의 아이솔레이션을 제공할 수 있게 된다. 본 논문에서는 대표적인 컨테이너 기반 가상머신인 리눅스 VServer가 적용되어 있는 리눅스 2.6.17 커널에 직접 구현하였으며, Lmbench 및 리눅스 커널 컴파일 등을 통하여 오버헤드를 측정하였고 1.6~7.2%의 적은 오버헤드로 이를 측정할 수 있음을 확인하였다.

Photon activation analysis of NIST SRM sediment sample using the electron linear accelerator at Pohang Accelerator Laboratory

Kim, HyoJin,Noh, Sung Jin,Kim, Hyun,Jeong, Dong Hyeok,Yang, Kwangmo,Kim, Guinyun,Kang, Yeong-Rok Springer-Verlag 2018 JOURNAL OF RADIOANALYTICAL AND NUCLEAR CHEMISTRY Vol.316 No.3

주관적 인지장애를 호소하는 지역사회 노인에 대한 다요인 인지능력 향상프로그램(‘씽씽두뇌 발전소’)의 효과성 검증을 위한 비교 연구

김효진 ( Hyojin Kim ),임선진 ( Seon-jin Yim ),이준노 ( Joon-noh Lee ),이원혜 ( Won Hye Lee ),한주현 ( Joo Hyun Han ),김경미 ( Kyungmi Kim ),김가영 ( Kayoung Kim ) 한국정신병리진단분류학회 2020 精神病理學 Vol.24 No.2

Objectives: This study explored the effects of nonpharmacological multifactorial memory improvement program (‘Ssing-Ssing Doonoi baljeonso (SSD)’) developed by the National Center of Mental Health in 2015 in community-dwelling elderly complaining of subjective memory impairment (SMI). Methods: A randomized, controlled, 8-weeks trial of SSD with double-blind assessments at baseline and end-point of treatment. A total of 117 elderlies with SMI were recruited from 10 community-based welfare centers in Seoul, Korea. Participants were randomly assigned to two groups: SSD and art therapy group. 8 sessions of treatment were administrated to the groups. Results: SSD significantly improved immediate recall, delayed recall of word memory test, all items of the logical memory test, and immediate recall, delayed recall, and recognition of the visuospatial function test (all p<0.05). Korean short version of Geriatric Depression Scale(S-GDS-K) was also significantly improved, and Memory Efficacy Questionnaire(MEQ), Prospective-Retrospective Memory Questionnaire(PRMQ), and Korean Dementia Screening Questionnaire(K-DSQ) were all significantly improved. In particular, compared to the art therapy group, the K-DSQ showed better results(time * group, F(1, 114)=6.585, p=0.012, η²=0.055), and S-GDS-K was a tendency to improve in SSD group (time * group, F(1, 114)=3.596, p=0.060, η²=0.031). Conclusion: Our multifactorial memory training program significantly enhanced memory, visuospatial function, mood and subjective memory efficacy. Compared with art therapy, SSD had more advantages in memory function of daily life and showed a tendency to improve depression. It is likely to be applied as a nonpharmacological treatment for the prevention of cognitive decline in the elderly with SMI/MCI.

Nanorods of a Thienoisoindigo Ethylhexylbenzene Formed with 2-Bromobenzaldehyde and a Phospholipid for Aqueous-Based Applications

Juran Noh,Hyejin Cho,Hyojin Kang,TaeJoo Shin,Changduk Yang,Juhyun Park 한국고분자학회 2016 한국고분자학회 학술대회 연구논문 초록집 Vol.41 No.2