Nanobody와 Hect E3 ubiquitin ligase의 합성을 이용한 Protein interference 기술의 개발

목차 (Table of Contents)

• Ⅰ. 서 론 1
• 1. Nanobody 1
• 2. Ubiquitin-Proteasome System 2
• 3. Hect E3 ligase 4
• 4. 연구 목적 6
• II. 실험 방법 및 재료 8
• 1. 균주 및 배양조건 8
• 1) 대장균주 및 배양 8
• 2) 동물세포 및 배양 8
• 2. 벡터 구축 9
• 1) 동물세포의 발현 벡터 구축 9
• 3. 재조합 벡터의 형질전환 10
• 1) 대장균의 형질전환 10
• 2) 동물세포의 형질전환 10
• 4. 형광 분석 10
• 1) 형광현미경을 이용한 형광 분석 10
• 2) Flow cytometer를 이용한 형광 분석 11
• (1) Flow cytometer 분석을 위한 세포 처리 11
• (2) Flow cytometer 분석 11
• 5. Western blot 11
• 1) Cell lysate 11
• 2) In vivo ubiquitination assay 12
• 3) Immunoblotting 12
• 6. Small interfering RNA (siRNA) 13
• 7. Immunofluorescence 13
• III. 결과 15
• 1. Ab-Hect ligase는 전체적으로 작용한다. 15
• 2. Ab-Hect ligase는 Ubiquitin-proteasome system에 의해서 protein을 분해한다. 17
• 3. Ab-Hect ligase는 RNA-i 보다 빠르고 효과적으로 protein을 감소시킨다. 21
• 4. Ab-Hect ligase는 다양한 GFP fusion protein를 분해한다. 24
• 5. Ab-Hect ligase는 endogenuous p53 protein를 분해한다. 27
• Ⅳ. 토의 33
• Ⅴ. 참고문헌 36
• Ⅵ. 영문 초록 38