삼일열 말라리아의 특이적인 진단을 위한 나노비드 기반의 비색 대비 면역분석법 = Nanobead-Based Colorimetric Immunoassay for Diagnosis of Malaria by Plasmodium vivax

목차 (Table of Contents)

• Ⅰ. 서론 1
• 1. 말라리아의 특징 1
• 2. 말라리아 원충의 생활사 및 체외 진단용 바이오마커 6
• 3. 말라리아의 진단법과 신속 항원 검사 10
• 3.1. 말라리아 진단법의 종류와 장단점 10
• 3.2. 신속 항원 검사에 사용되는 바이오 소재의 종류 12
• 4. 본 연구의 목적 15
• Ⅱ. 재료 및 방법 17
• 1. 삼일열 말라리아 원충 젖산 탈수소효소의 유전자 클로닝 및 형질전환 대장균 제작 17
• 1.1. 재조합 플라스미드 제작 17
• 1.2. 형질전환 대장균 제작 및 선별 18
• 2. 삼일열 말라리아 원충 젖산 탈수소효소의 과발현 조건 탐색 및 순수 분리·정제 19
• 2.1. 삼일열 말라리아 원충 젖산 탈수소효소의 과발현 조건 탐색 19
• 2.2. 삼일열 말라리아 원충 젖산 탈수소효소의 정제 및 정량 20
• 2.2.1. 삼일열 말라리아 원충 젖산 탈수소효소의 정제 20
• 2.2.2. 정제된 삼일열 말라리아 원충 젖산 탈수소효소의 정량 21
• 2.3. 삼일열 말라리아 원충 젖산 탈수소효소의 생화학적 특성 분석 22
• 2.3.1. 삼일열 말라리아 원충 젖산 탈수소효소의 전기영동 22
• 2.3.2. 삼일열 말라리아 원충 젖산 탈수소효소의 효소 활성도 분석 22
• 3. 삼일열 말라리아 원충 젖산 탈수소효소에 대한 하이브리도마 개발 23
• 3.1. 하이브리도마 제작 23
• 3.1.1. 면역플레이트의 제작 23
• 3.1.2. 마우스 면역화 및 항체 역가 분석 23
• 3.1.3. 세포 융합을 통한 하이브리도마 제작 24
• 3.2. 하이브리도마 선별 25
• 4. 단일클론항체의 정제 및 특성 분석 26
• 4.1. 친화성 크로마토그래피 기법을 이용한 단일클론항체 정제 26
• 4.2. 단일클론항체의 생화학적 특성 분석 27
• 4.2.1. 단일클론항체의 전기영동 27
• 4.2.2. 단일클론항체의 이소타입 분석 27
• 4.2.3. 단일클론항체의 결합 친화도 분석 28
• 4.2.4. 단일클론항체의 교차 반응성 확인 28
• 4.2.5. 웨스턴 블롯을 통한 단일클론항체의 교차 반응성 확인 29
• 5. 삼일열 말라리아 원충 젖산 탈수소효소 검출용 진단 키트 제작 및 성능평가 30
• 5.1. 단일클론항체와 나노비드의 컨쥬게이션 30
• 5.2. 진단 키트 제작용 항체 쌍 선별 30
• 5.3. 진단 키트 제작 및 성능 평가 31
• 5.3.1. 진단 키트의 제작 31
• 5.3.2. 버퍼 조건에서의 검출한계 분석 및 교차 반응성 확인 31
• 5.3.3. 혈액 환경에서의 검출한계 분석 및 교차 반응성 확인 33
• Ⅲ. 결과 및 고찰 34
• 1. 삼일열 말라리아 원충 젖산 탈수소효소의 유전자 클로닝 및 형질전환 대장균 제작 34
• 1.1. 재조합 플라스미드 제작 34
• 1.2. 형질전환 대장균 제작 및 선별 34
• 2. 삼일열 말라리아 원충 젖산 탈수소효소의 과발현 조건 탐색 및 순수 분리·정제 36
• 2.1. 삼일열 말라리아 원충 젖산 탈수소효소의 과발현 조건 탐색 결과 36
• 2.2. 삼일열 말라리아 원충 젖산 탈수소효소의 정제 결과 38
• 2.3. 삼일열 말라리아 원충 젖산 탈수소효소의 생화학적 특성 분석 결과 40
• 2.3.1. 삼일열 말라리아 원충 젖산 탈수소효소의 전기영동 결과 40
• 2.3.2. 삼일열 말라리아 원충 젖산 탈수소효소의 효소 활성도 분석 40
• 3. 삼일열 말라리아 원충 젖산 탈수소효소에 대한 하이브리도마 개발 42
• 3.1. 면역화 된 마우스의 항체 역가 확인 42
• 3.2. 하이브리도마 선별 45
• 4. 단일클론항체의 정제 및 생화학적 특성 분석 45
• 4.1. 친화성 크로마토그래피 기법을 이용한 단일클론항체 정제 45
• 4.2. 단일클론항체의 생화학적 특성 분석 45
• 4.2.1. 단일클론항체의 전기영동 결과 45
• 4.2.2. 단일클론항체의 이소타입 분석 47
• 4.2.3. 단일클론항체의 결합 친화도 분석 47
• 4.2.4. 단일클론항체의 교차 반응성 확인 결과 51
• 5. 삼일열 말라리아 원충 젖산 탈수소효소 검출용 진단 키트 제작 및 성능평가 51
• 5.1. 진단 키트 제작용 항체 쌍 선별 결과 54
• 5.2. 진단 키트 제작 및 성능 평가 결과 54
• 5.2.1. 버퍼 조건에서의 검출한계 분석 및 교차 반응성 확인 결과 54
• 5.2.2. 혈액 환경에서의 검출한계 분석 및 교차 반응성 확인 결과 57
• Ⅳ. 결론 59
• 참고문헌 60
• ABSTRACT 68