Tacrolimus(FK506)에 의한 Jurkat T lymphocyte의 microRNA 분석 = MicroRNA Profiling of Tacrolimus(FK506) -stimulated Jurkat Human T Lympocytes

국문 초록 (Abstract)

연구목적; T 세포의 활성화와 관련하여 calcineurin inhibitor계의 면역억제제인 FK506(Tacrolimus)에 의한 nuclear factor of activated T cells(NFATs) 조절 기전은 명확하지 않다. 따라서 본 연구에서는 사람 T 림프구 세포주인 Jurkat 세포에서 FK506에 의한 세포독성을 확인하고, microRNA array 분석을 통하여 다양한 유전자의 발현 조절과 관련된 특정 microRNA를 조사하여 표적유전자들에 대한 기능과 발현의 차이를 확인하고자 하였다.
실험방법; FK506에 의한 Jurkat 세포 독성을 조사하기 위하여 다양한 농도와 시간별로 FK506을 처리하고 MTT assay를 통하여 세포생존율의 변화를 조사하였다. MicroRNA asssay를 수행하기 위하여 대조군에 비하여 약 20~30%의 세포생존율의 감소를 보이는 20 μM 농도의 FK506을 다양한 시간 처리하고 총 RNA를 추출하여 GenomicTree사의 Agilent's human microRNA chip을 이용하여 microRNA를 조사하였다. 또한 RT-PCR을 통하여 표적 유전자의 발현변화를 조사하였다.
결과; Jurkat 세포에 20 μM 농도의 FK506을 처리한 결과 let-7a*, miR-20a* 및 miR-487a 등을 포함한 21개의 microRNA가 시간 의존적으로 감소하였고 miR-202, miR-485-5p 및 miR-518c* 등을 포함한 18개의 microRNA는 시간 의존적으로 증가하였다. FK506에 의한 Jurkat 세포사멸에서 microRNA에 의해 조절되는 세포주기 관련유전자는 62개였고 세포자멸사와 관련된 p53 signaling pathway 유전자는 38개였다. 또한 calcineurin의 활성 억제와 관련된 calcium signaling pathway 유전자는 55개였으며 T 세포 수용체 관련 유전자는 35개가 microRNA에 의해서 조절되었다.
결론; 이상의 결과 FK506에 의한 Jurkat 세포사멸에서 microRNA microarray 분석은 NFAT의 활성억제, 세포자멸사, 세포주기 등의 다양한 신호전달경로를 조절하는 유전자의 발현에 관여하는 다양한 microRNAs를 도출하였다. 따라서 면역억제제의 장기이식 및 자가 면역치료에 대한 분자생물학적 기반을 제공할 수 있으리라 기대된다.

목차 (Table of Contents)

• 국문초록 1
• 서 론 3
• 재료 및 방법 6
• 결 과 10
• 고 찰 54
• 결 론 57
• 참고문헌 59
• 영문초록 68