복부 대동맥류의 혈관내 치료에서 endoleak 발생에 영향을 미치는 인자

김민상 전남대학교 대학원 2012 국내석사

배경 및 목적: 복부 대동맥류가 있는 환자에서 혈관내 대동맥류 치료(EVAR)를 받은 환자를 대상으로 단기 치료결과 및 endoleak에 영향을 주는 인자를 분석하였으며 기존의 수술적 치료 결과와 비교하였다. 대상 및 방법: 2006년 1월부터 2011년 6월까지 전남대학교 병원에서 복부 대동맥류로 EVAR를 시행받은 환자 122명이 포함되었다. 결과: 122명의 환자를 후향적으로 분석하였다. 남자는 111명, 여자는 11명으로 남자가 전체의 91.7%이며 평균연령은 70.7세(범위: 45~89)였다. 모든 환자가 신동맥하방의 대동맥류 소견을 보였으며 대동맥류의 평균 크기는 5.74cm(범위: 2.7~11)였다. 이 중 47명은 대동맥에만 국한된 대동맥류 소견을, 37명은 양측 총장골동맥까지 침범되었고, 25명은 우측 총장골동맥, 9명은 좌측 총장골동맥까지 침범했으며 기타 4명이었다. 합병증은 47명(38.5%)에서 발생했으며 endoleak가 37명(30.3%), 파행 12명(9.8%) 등이었다. 이 중 endoleak로 2차적 중재술을 받은 경우는 4명, 개복수술을 받은 경우는 1명이었다. 시술과 연관된 사망은 1명으로 파열된 대동맥류 환자에서 응급시술을 받은 경우였다. Endoleak가 있는 군과 없는 군을 환자의 나이, 성별, BMI, 동맥류 크기와 형태, 파행의 유무에 따라 비교하였다. 여성인 경우 endoleak가 유의하게 높았으며 80세 이상에서 endoleak의 높은 발생율을 보였다. 참고로 본원에서 1991년 1월부터 2003년 1월까지 개복수술을 받은 환자 91명의 사망률은 24.1% (선택적수술 49명 중 0명, 응급수술 42명 중 22명)였다. 결론: EVAR의 주요 합병증인 endoleak에 영향을 주는 인자로 여성이 유의하게 높았으며 80세 이상에서 endoleak의 높은 비율을 보였다. 따라서 환자가 여성이며 고령일 때 더욱 주의 깊고 세심한 시술이 필요하다. 또한 이전에 선택적인 수술적 치료와 비교하여 EVAR가 결코 뒤처지지 않으므로 복부 대동맥류를 진단받았을 때 크기와 관계없이 primary treatment로서 예방적인 EVAR를 시행하는 것이 좋을 것으로 생각된다.

FK506에 의한 Heme Oxygenase-1(HO-1)의 활성에 관한 연구

정용민 전남대학교 대학원 2009 국내석사

Tacrolimus (이하 FK506)는 진균에서 분리된 면역억제제로서 T 림프구의 활성화를 억제한다. 특히 FK506은 in vitro 실험에서 강력한 세포자멸사 효과가 보고되어 있으며, 거부반응의 예방과 난치성 거부반응의 구조요법으로 효과적이다. 그러나 FK506에 의한 T 림프구 세포자멸사에서 신호전달 과정 및 작용기전에 대한 연구가 미흡한 실정이다. 본 연구는 FK506이 사람 T 림프구 세포자멸사에 대한 세포내 활성산소의 신호 전달 체계와 관련 단백질의 발현 변화를 규명하고자 하였다. 그 결과 FK506에 의하여 T 림프구 세포주인 Jurkat 세포에서 세포내 활성산소종인 H₂O₂와 NO의 생성이 증가 되었으며, 이는 세포내 iNOS의 발현 증가, Bak 단백질의 발현증가와 PUMA의 발현감소에 따른 미토콘드리아 기능장애로 판단되어진다. 특히 FK506에 의한 Jurkat 세포자멸사는 세포내 산화성 손상의 지표이자 항산화 단백질인 HO-1의 발현변화에 의해 조절 되었다. 이러한 HO-1은 전사인자 Nrf2의 핵내 이동에 의해 초래되었으며, HO-1의 유도제인 CoPP 처리에 의한 세포내 H₂O₂ 및 NO의 생성 감소와, HO-1 활성억제제인 ZnPP에 의한 세포내 H₂O₂ 및 NO의 생성 증가는 HO-1의 세포 보호효과를 시사 하였다. 또한 ZnPP에 의한 HO-1의 발현 억제에 의해 iNOS 단백질의 발현이 조절되었다. 따라서 HO-1의 발현 및 활성조절을 통해 FK506에 의한 Jurkat T 세포의 세포사멸효과를 항진 할 수 있을 것으로 사료된다. Tacrolimus (FK506) has been widely used as an immunosuppressant in organ transplanted recipients to suppress organ rejection phenomenon. We investigated the role of oxidative stress by FK506 on human Jurkat T cells. Treatment with FK506 increased the generation of reactive oxygen species (ROS), including hydrogen peroxide and superoxide anion, and NO in Jurkat cells in a dose-dependent manner. Immunohistochemistry and Western blot analysis dada revealed the hemoxygenase-1 (HO-1) was induced by the addition of FK506 in Jurkat cells. We further found that a marked dissociation of Nrf2/Keap1 and subsequent intranuclear translocation of Nrf2 were occurred in Jurkat cells treated with FK506. We also examined the transcriptional activity of HO-1 among Nrf2-driven transcripts, including HO-1, NQO1, GCLC, GCLM, GST micro-1, and GSTA4. These results suggest that FK506 induces Nrf2-driven transcriptional activation of ARE through HO-1 activation and free radicals, such as ROS and NO.

Tacrolimus(FK506)에 의한 Jurkat T lymphocyte의 microRNA 분석

이호균 전남대학교 대학원 2010 국내박사

연구목적; T 세포의 활성화와 관련하여 calcineurin inhibitor계의 면역억제제인 FK506(Tacrolimus)에 의한 nuclear factor of activated T cells(NFATs) 조절 기전은 명확하지 않다. 따라서 본 연구에서는 사람 T 림프구 세포주인 Jurkat 세포에서 FK506에 의한 세포독성을 확인하고, microRNA array 분석을 통하여 다양한 유전자의 발현 조절과 관련된 특정 microRNA를 조사하여 표적유전자들에 대한 기능과 발현의 차이를 확인하고자 하였다. 실험방법; FK506에 의한 Jurkat 세포 독성을 조사하기 위하여 다양한 농도와 시간별로 FK506을 처리하고 MTT assay를 통하여 세포생존율의 변화를 조사하였다. MicroRNA asssay를 수행하기 위하여 대조군에 비하여 약 20~30%의 세포생존율의 감소를 보이는 20 μM 농도의 FK506을 다양한 시간 처리하고 총 RNA를 추출하여 GenomicTree사의 Agilent's human microRNA chip을 이용하여 microRNA를 조사하였다. 또한 RT-PCR을 통하여 표적 유전자의 발현변화를 조사하였다. 결과; Jurkat 세포에 20 μM 농도의 FK506을 처리한 결과 let-7a*, miR-20a* 및 miR-487a 등을 포함한 21개의 microRNA가 시간 의존적으로 감소하였고 miR-202, miR-485-5p 및 miR-518c* 등을 포함한 18개의 microRNA는 시간 의존적으로 증가하였다. FK506에 의한 Jurkat 세포사멸에서 microRNA에 의해 조절되는 세포주기 관련유전자는 62개였고 세포자멸사와 관련된 p53 signaling pathway 유전자는 38개였다. 또한 calcineurin의 활성 억제와 관련된 calcium signaling pathway 유전자는 55개였으며 T 세포 수용체 관련 유전자는 35개가 microRNA에 의해서 조절되었다. 결론; 이상의 결과 FK506에 의한 Jurkat 세포사멸에서 microRNA microarray 분석은 NFAT의 활성억제, 세포자멸사, 세포주기 등의 다양한 신호전달경로를 조절하는 유전자의 발현에 관여하는 다양한 microRNAs를 도출하였다. 따라서 면역억제제의 장기이식 및 자가 면역치료에 대한 분자생물학적 기반을 제공할 수 있으리라 기대된다.

Bortezomib과 JSI-124 병합 처리된 종양항원 부가 수지상세포의 항종양 효과

김춘희 전남대학교 대학원 2010 국내박사

Dendritic cell (DCs) based immunotherapy is emerging as a useful tool to treat multiple myeloma (MM). Although several tumor target antigens have been used, the clinical effectiveness of the vaccination is still limited in the MM and the improvement of immunotherapeutic approach is clearly needed. Recently, bortezomib is known to increase the expression of heat shock protein (HSP) 90 on the surface of tumor cells for enhancing the antitumor immunity against cancer and the ability of bortezomib to kill tumor cells could be improved by inhibition of signal transducer and activator of transcription 3 (STAT3). In this study, I investigated whether bortezomib and JSI-124, an STAT3 inhibitor, could be synergistically used to generate potent cytotoxic T lymphocytes (CTLs) by inducing HSP expression in necrotic tumor cells to loading onto DCs. The combination of bortezomib and JSI-124 showed to induce necrotic cells mostly from tumor cells and led to increase the expression of HSP90 compared to bortezomib or JSI-124 alone. The ability to uptake tumor antigens that induced by bortezomib, JSI-124 or both was comparable in DCs and there was no significant difference in the phenotypic expression of DCs. DCs loaded with the combination of bortezomib and JSI-124 treated tumor cells showed the increased production of IL-12p70 during maturation as well as after CD40L stimulation compared to bortezomib or JSI-124 alone. Necrotic tumor cells treated by bortezomib, JSI-124 or both were not increased the production of IL-10 by DCs. CTLs stimulated by both bortezomib plus JSI-124 treated tumor cells-loaded DCs displayed a greater number of IFN-r-secreting cells against autologous tumor cells than did those stimulated by either bortezomib or JSI-124 treated tumor cells-loaded DCs. In conclusion, these results indicate that DCs loaded with necrotic tumor cells that induced by the treatment of bortezomib and JSI-124 could elicit potent antitumor activity of CTLs. 수지상세포를 이용한 암면역치료가 다발성골수종의 유용한 치료법으로 각광받고 있다. 여러 종양 표적 항원들이 이용되었지만, 그 임상적인 유용성에 대해서는 여전히 제한점이 있어왔다. Bortezomib은 종양세포의 표면에 heat shock 단백질 (HSP) 90의 발현을 증진시켜서, 암세포에 대한 항종양 면역력을 증진시키는 것으로 알려져 있다. Bortezomib의 암세포를 살상하는 능력은 signal transducer and activator of transcription 3 (STAT3)의 억제에 의해서 더욱 증가할 수 있다. 저자는 bortezomib과 STAT3 억제제인 JSI-124를 조합하여 처리한 종양세포가 HSP90의 발현을 증가시키고, 이러한 종양세포로 부가된 수지상세포가 종양세포에 특이성을 보이는 강력한 세포독성 T 림프구를 유도할 수 있는지 알아보았다. Bortezomib과 JSI-124의 조합으로 처리된 종양세포는 대부분 괴사를 보였으며, bortezomib이나 JSI-124 단독으로 처리된 경우보다 HSP90의 발현이 증가하였다. Bortezomib과 JSI-124로 처리한 종양세포를 부가시킨 수지상세포가 bortezomib이나 JSI-124 단독으로 치료하여 제조한 수지상세포보다 IL-12p70의 생산이 증가하였으나, IL-10 생산능은 증가하지 않았다. Bortezomib과 JSI-124로 처리된 종양세포를 부가시킨 수지상세포에 의해서 제조된 T 림프구는 bortezomib과 JSI-124 단독으로 처리하여 제조한 세포독성 T 림프구보다 표적종양세포에 대해서 유의하게 INF-의 분비능이 증가하였다. 결론적으로 bortezomib과 JSI-124 병합처리한 종양세포를 부가시킨 수지상세포에 의해 항종양 효과를 보일 수 있는 세포독성 T 림프구의 제조가 가능함을 시사하고 있다.

급성전골수성백혈병 HL-60 세포주에서 방사선 조사에 의한 세포고사기전 연구

김혜정 전남대학교 대학원 2001 국내박사

방사선 조사에 의한 세포사멸기전은 아직도 명확히 규명되어 있지 않으나, 최근 연구보고에 의하면 방사선 조사 후 세포고사를 일으키는 신호전달계의 활성화가 세포사멸에 관여함이 밝혀지고 있다. 따라서 본 연구에서는 방사선 조사에 의하여 유발되는 세포고사의 신호전달기전, 특히 caspase계 cysteine protease의 활성화, Bcl₂및 Bax 단백질, cytochrome c의 세포질내로의 방출, Fas 와 Fas-L 단백질의 발현양상 등의 조사를 통하여 방사선 조사에 의하여 유발되는 세포고사기전을 규명하고자 하였다. 방사선 조사 후 세포의 생존율은 방사선 조사선량과 조사 후 시간경과에 따라 현저하게 감소됨을 알 수 있었다. 세포고사의 특징인 사다리형 DNA 분절은 방사선 조사 4시간 후부터 시간경과에 따라 증가하였으며, 조사선량이 증가할수록 더욱 현저하였다. 이는 방사선 조사에 의해 유발되는 세포사멸이 세포고사에 의한 것을 시사하였다. HL-60 세포주에서는 방사선 조사 후 caspase계 cysteine proteases 중 caspase-2, 3, 6, 8 및 9의 활성화가 방사선 조사 후 시간경 과에 따라 증가하였으며, 16Gy의 방사선량 조사 4시간 후에 poly(ADP-ribosyl) polymerase(PARP)의 분절과 Western blotting을 이용한 procaspase- 3의 분절을 확인함으로서 caspase-3의 활성을 간접적으로 증명할 수 있었다. Bcl₂단백질은 방사선 조사 후 시간경과에 따라 감소하였으며, Bax 단백질은 시간경과에 따라 발현이 증가하는 양상을 관찰할 수 있었다. 방사선 조사 후 cytochrome c의 세포질내로의 방출을 확인할 수 있다. 또한 Fas 및 Fas-L 단백질 모두 방사선 조사 후 발현이 증가하는 양상을 관찰할 수 있었다. 이상의 결과로 미루어 볼 때, HL-60 세포주에서 방사선 조사에 의해 유발되는 세포사멸이 세포고사기전에 의해서 매개됨을 확인하였으며, 이는 세포내 caspase 계 cysteine proteases, Bcl₂, Bax, 세포질내로의 cytochrome c 방출 그리고 Fas, Fas-L가 관여하는 신호전달경로의 활성화에 의한 것임을 의미하였다. The mechanical insights of death of cancer cells by ionizing radiation are not yet clearly defined. Recent evidences have demonstrated that radiation therapy may induce cell death via activation of signaling pathway for apoptosis in target cells. This study is designed whether ionizing radiation may activate the signaling cascades of apoptosis including caspase family cysteine proteases, Bcl₂/ Bax, cytochrome c and Fas/Fas-L in target cells. Ionizing radiation decreases the viability of HL-60 cells in a time and dose dependent manner. Ionizing radiation-induced death in HI-60 cells is an apoptotic death which is revealed as characteristic ladder-pattern fragmentation of genomic DNA over 16Gy at 4 hours. Ionizing radiation induces the activation of caspase-2, 3, 6, 8 and 9 of HL-60 cells in a time-dependent manner. The activation of caspase-3 protease is also evidenced by the digestion of poly (ADP-ribose) polymerase and procaspase-3 with 16Gy ionizing irradiation. Anti-apoptotic Bcl₂ expression is decreased but apoptotic Bax expression is increased with mitochondrial cytochrome c release in a time-dependent manner. In additon, expression of Fas and Fas-L is also increased in a time dependent manner. These data suggest that ionizing radiation-induced apoptosis is mediated by the activation of various signaling pathways including caspase family cysteine proteases, Bcl₂/Bax, Fas and Fas-L in a time and dose dependent manner.

동정맥루 시행후 조기개존률의 영향인자에 관한 고찰

이호영 전남대학교 대학원 2002 국내석사

만성신부전 환자에게 있어 혈액투석을 장기간 시행하기 위해서는 반복천자에도 잘 견딜 수 있고 다량의 혈류를 유지시킬 수 있는 혈관이 필요하다. 이를 위해 많은 병원에서 동정맥루를 시행하고 있는데 혈액투석을 위해 시술한 동정맥루의 개존에 영향을 미치는 인자에 대해서는 이미 많은 보고가 있어왔고 그 중에서 특히 혈관 문합시 유입 혈관 및 유출 혈관의 상태, 환자의 전신 상태, 고혈압, 뇨독증의 정도 등이 개존과 밀접한 관계가 있다고 알려져 있다. 특히, 환자의 상태가 장기간의 신부전으로 악화되고 탈수된 상태로 유입 동맥의 압이 너무 낮거나 동정맥루를 시행한 유출 정맥의 원위부에서 협착이 있는 경우엔 자연히 개존율이 떨어질 수밖에 없다. 이에 본 저자는 내동정맥루술을 시행한 환자의 술전 또는 술중, 후의 상황이나 검사소견이 문합부의 개존과 어떤 관계가 있는가를 알아보기 위해 본 연구를 시행하였다. 전남대 병원에서 1997년 1월부터 1998년 6월까지 동정맥루 조성술 시행 받은 180명 중 추적 조사가 가능했던 125명을 대상으로 하였는데 이중 남자가 65예 여자가 60예 이었으며 연령분포는 20대에서 70대까지이다. 모든 환자는 수술전 일주일 이내에 시행했던 혈중 뇨소질소치, 혈청 크레아치닌, 혈당치, 평소 혈압, 수술당일 혈압 등을 기록하였다. 또 문합 직후의 상황을 보기 위해 문합후 문합부의 진동과 혈관 확장도가 아주 좋은 것, 보통, 나쁜 것 등 세 가지로 분류했고 혈관상태는 동맥경화가 있는지, 이전의 혈관천자에 의해 정맥주위에 섬유화가 있는지, 신축성이 좋은 혈관인지 등으로 나누었다. 문합 위치나 분합 방법에 관계없이 모든 환자의 개존율을 산출한 결과 12개월 개존율은 73.3%, 24개월 째 개존율은 71.5%로 나타났다. 수술당시 환자의 나이가 낮은 군일수록 개존율이 높음을 보여 주었으며 통계적 유의성을 나타내었으며(p=0.034) 다른 기저 질환의 유무로는 당뇨가 개존율에 영향을 미치며 통계적인 의의가 있는 것으로 나타났다.(p=0.0397) 고혈압의 경우 혈압이 높은 군이 개존율에서 계속 높게 유지되었으며 통계적인 의의가 있었다.(p=0.0424) 문합 직전 마지막으로 측정한 혈중뇨소질소치가 50mg/dL 미만인 군과 50-99mg/dL 인군 그리고 100mg/dL 이상인 군으로 나누었더니 혈중뇨소질소치가 높은 군일수록 개존율을 크게 유지했으며 이들간에는 통계적인 유의성을 나타내었다.(p=0.0462) 혈청 크레아치닌을 5mg/dL 미만, 5-9.9mg/dL, 10-14.9mg/dL, 15mg/dL 이상인 군으로 나누었더니 크레아치닌 치가 높은 군일수록 개존율이 높았다.(p=0.014) 이와 같은 내용을 요약해 볼 때 술후 개존율을 높이는 주요한 인자로는 age, DM, Hypertension, BUN, Creatinine level 등이 있으며 통계적인 의의를 나타내었다. Purpose: Many studies show the important factors for better patency rate of the arteriovenous patients, age, the site of artery, the presence of diabete or hypertension and the BUN and creatinine level are the most important factors in the patency rate of the arteriovenous fistula. This study was designed to identify factors that may influence the patency rate of the arteriovenous fistula. Method: 125 consecutive patients who underwent internal arteriovenous fistula formation in Chonnam National University Hospital during 2 years from 1999 to 2000 were reviewed and analyzed. The analyzing factors were age, sex, presence of diabete, and hypertension, the level of BUN, creatinine. Results: Overall patency rates of upper arm arteriovenous fistula were 73.3% at one year and 71.5% at the end of two year. BUN level at the time of the fistula formation was another significant factor, and one year patency rates of the groups with BUN less than 50 mg/dL, BUN between 50 and 99 mg/dL, and BUN over 100 mg/dL were, 50.4%, 64.8% and 87.5% respectively, and these differences continued ar least for 30 months after the fistula creation(p=0.046). Serum creatinin level also had close relationship with patency and one year patency rate of group with serum creatinine levels less than 5 mg%, 5-9.9 mg%, over the 10 mg% were, 48.5%, 67.5% and 84.5% respectively(p=0.014). Differences in patency rates were also notes according the presence of diabete mellitus(p=0.0397) and the hypertension(p=0.0424). Age is also significant factors on this study. Conclusion: Among the suspected factors that may influence the patency of fistula, BUN, serum creatinine and the presence of diabete or hypertension were statistically significant factors on multivariant analysis.

FK506에 의한 Jurkat 세포자멸사 유전자 발현분석

장태영 전남대학교 대학원 2009 국내석사

연구목적; Tacrolumus (FK506)은 자가 면역 질병, 골수 이식 및 장기 이식과 같은 다양한 의학적 상황에 폭넓게 사용하는 면역억제제이다. 그러나, FK506의 부작용은 면역억제제로서 심각한 임상적 문제로 남아있다. 본 연구에서는 사람 Jurkat T세포에서 FK506에 의한 농도 및 시간 의존적인 세포자멸사에서 유전자 발현 변화를 cDNA microarray 분석을 이용하여 확인하고자 하였다. 실험방법; FK506을 Jurkat T세포에 농도 및 시간별로 처리하고 MTT를 이용하여 세포생존율을 조사하였다. 대조군과 비교하여 약 20~30%의 세포생존율의 감소를 보이는 농도에서 총 RNA를 추출하고 순도 및 안정성을 확인하여 GenomicTree사에 의뢰하여 agilent's human 44K chip을 이용하여 cDNA microarray를 수행하였다. 결과; FK506에 의한 Jurkat 세포자멸사와, 세포주기 조절에 관련된 유전자의 발현이 증가 또는 감소하였다. 특히, FK506 처리시 Calcineurin의 활성 억제와 관련하여 PKC의 기질인 MARCKS와 전사조절 인자인 Sp3의 발현과 세포주기의 조절에 관련된 Id1과 Id3의 발현이 현저히 증가하였다. 그러나 Bioactive peptide (thrombin 및 angiotensin II)에 의한 유전자인 Src homology 2, G protein 및 MEK 2의 발현은 감소하였다. 또한 insulin receptor, DRPLA (Atrophin 1) 및 세포의 운동과 형태 유지에 관련된 bai1-associated protein 2의 발현은 감소하였다. 결론; FK506은 calcineurin의 활성 억제에 따른 NFAT의 활성을 억제뿐 아니라 세포자멸사, 세포주기, 다양한 신호경로 및 임상실험에서 나타나는 당뇨병의 발현과 세포의 운동과 형태 유지에 관련된 유전자 발현이 감소되어 장기이식 및 자가면역 치료에 적절한 농도 및 치료 기간의 조절이 요구된다. Tacrolumus (FK506) is a widely used immunosuppressive agent in the treatment of various medical conditions, including autoimmune disease, born marrow and organ transplantations. Previously FK506 is known to cause apoptotic death of human Jurkat T cells. Current study was designed to analysis the gene expression pattern of Jurkat T cells after FK506 application by using cDNA microarray (Agilents human 44k glass chip from GenomicTree Co). Treatment of Jurkat T cells with FK506 resulted in a decrease of cell viability in a time- and dose-dependent manner. Next, total RNA of Jurkat T cells was extracted by using TRIzol reagent and used to carried out confirmation test for the purity and integrity of total RNA. Gene expression levels related to apoptosis and cell cycle process were mainly focussed to analyze in FK506-treated Jurkat T cells. According to the inhibition of calcineurin activity, MARCKS in PKC substrates and Sp3 transcription factor was markedly increased in FK506-treated cells. Also, cell cycle control gene Id1 and Id3 were induced in expression from FK506-treated Jurkat T cells. However, FK506 decreased the expression of Src homology 2, G protein, and MEK 2 genes in bioactive peptide induced signaling pathway. It also reduced the expression level of the insulin receptor, DRPLA (Atrophin 1) and bai1-associated protein 2 genes, which are involved in the regulation of cell motility and morphology control. In addition, the author will continue to chase the exact functional roles of genes which are markedly changed in expression by FK506 in human Jurkat T cells in vitro and in vivo experimental models.

만성 심부정맥 혈전증에 시행한 경피경관혈관성형술 및 스텐트 삽입술

하일주 전남대학교 대학원 2003 국내석사

최근 급성 심부정맥 혈전증에 도관을 통한 혈전 용해치료 및 경피경관혈관성형술(스텐트 삽입 병행)의 효과가 높은 것으로 보고되고 있으나 만성 심부정맥 혈전증에 있어 그 유용성에 대해서는 제한적임으로 알려져 있다. 이에 6개월 이상 장기간 항응고제를 사용하였으나 증상개선이 없는 만성 심부정맥 혈전증에서 혈전 용해 치료 및 경피경관혈관성형술과 스텐트 삽입술을 시술하고 효용성, 시술의 합병증 및 단기 치료성적을 알아보고자 하였다. (대상 및 방법) 1987년 8월부터 2001년 12월까지 심부정맥 혈전증으로 항응고제 치료를 받은 환자 중 증상의 호전 없이 만성 심부정맥 혈전증으로 진행된 환자 15명을 대상으로 국소 혈전 용해제와 경피경관혈관성형술 및 스텐트 삽입술을 시행하였다. 환자의 나이, 성별, 부위별 발생빈도, 항응고제 치료기간, 치료전의 증상 및 정맥 조영술상의 폐쇄 정도, 혈전 용해 정도와 항응고제 치료기간 및 침범 정맥의 관련성, 합병증을 시술 성공한 경우(Group I)와 실패한 경우(Group II)로 나누어서 분석하였다. (결과) 15명중 남자가 8명, 여자가 5명이었으며 발병 부위는 좌측 하지가 12례, 우측 하지가 3례였고, 항응고제 치료기간은 6개월부터 13.5년으로 평균 45개월 이었으며 치료전의 증상은 하지의 부종이 가장 많았으며, 동통, 동통을 동반한 부종, 피부 색조 변화, 정맥성 파행증, 궤양 순이었다. 혈전 위치에 있어서, Group I은 외장골 정맥 8례, 총장골 정맥 6례, 총대퇴 정맥 6례로 1례에서만 표피대퇴 정맥에 위치하였으며 Group II는 총장골 정맥 7례, 외장골 정맥 6례, 총 대퇴 정맥 6례로, Group I과 큰 차이는 보이지 않았지만 표피 대퇴정맥에 6례 슬와정맥 5례로 Group I과 의의 있게 다른 결과를 보였다. 시술 후 임상증상의 심한 정도는 Group I에서는 치료 후 1주일 경부터 증상이 감소되며 특히 하지 부종, 동통, 정맥성 파행에서 점점 개선되는 양상으로 나타났다. 합병증으로 1예에서 정맥천자부위의 국소 출혈이 있었으며, 흉통 및 호흡곤란이 1예에서 보였으나 시행한 방사선 동위원소 폐 스캔상 특이소견은 보이지 않았다. (결론) 혈류개통에 성공한 군과 실패한 군 두 군간에 연령, 성비, 유발인자, 심부정맥 혈전증의 시술 전 치료기간 임상증상과 시술의 성공 여부 사이에 의의 있는 상관관계는 없었으며, 혈전이 장골-대퇴 정맥에 국한된 경우가 대퇴정맥 이하 부위까지 침범한 경우보다 예후가 좋았다. Although it has been reported lately that the effect of thrombolytic agents therapy and percutaneous transluminal angioplasty(conducted with stent insertion) on acute deep venous thrombosis is great, The report of it's usefulness on chronic deep venous thrombosis is little known. Thus this author decided to aggressively treat chronic deep venous thrombosis which did not get better after using anticoagulants for more than six months and to examine the utility of PTA and stent insertion, complication in administration, and short-term treatment results. (Subject and method) Fifteen patients, who did not get better and developed into chronic deep venous thrombosis after being treated with anticoagulants from August 1987 to December 2001, were selected and conducted with local thromobolytics, PTA, and stent insertion. Patients' age, sex, incidence by region, the period of anticoagulant treatments, symptom before thrombolytic agents therapy, degree of lysis, the period of anticoagulants therapy and its relationship with attacked vein, and complication were analyzed with two groups: in case of successful treatment(Group I) and failing(Group II). (Results) Male was 10 and female was 5, and a left limb was 12 cases and right limb 3 in the attacked region. The period of anticoagulants therapy was ranged from 6 months to 13 years 6 months with mean 45 months. For the symptom before thrombolytic agents therapy, edema was most frequent, followed by pain, edema accompanied with pain, pigmentation, venous claudication, and ulcer. For thromobus location, two groups were significantly different in some cases: Group I was located in external iliac vein(8), common iliac vein(6), common femoral vein(6), and femoral vein(1), while Group II was located in external iliac vein(7), common iliac vein(6), common femoral vein(6), femoral vein(6), and popliteal vein(5). In a clinical symptom after treatment, Group I was improved gradually from 1 week after treatment, especially limb edema, pain, and venous claudication. In complication, local hemorrhage of venipuncture region(1) and chest pain and dyspnea(1) happened and there was no significant finding in a lung scanning. (Conclusion) There was no significant correlation in age, the ratio of sex, predisposing factor, treatment period before deep venous thrombosis therapy, clinical symptoms, and whether treatment is successful or not between successful and failing group. The case limited thrombus to iliac or thigh vein showed good prognosis.

복막강 지방육종의 세포증식능과 p53단백의 발현

오병렬 全南大學校 大學院 2004 국내석사

(서론) 지방육종의 발생은 p53유전자와 함께 MDM2 유전자의 변이가 관여한다고 알려져 있으며, 지방육종의 병리조직학적 유형이 환자의 예후와 관련있다고 알려져 있다. 이 연구는 병리조직학적 유형, p53 유전자의 변이, 그리고 증식기분획 사이의 연관성을 연구하기 위하여 시행되었다. (대상 및 방법) 복강의 원발성 지방육종 24예를 대상으로 병리조직학적 유형에 따른 면역조직화학적 염색을 시행하여 p53 단백질과 Mib-1의 발현을 비교 관찰하였다. (결과) p53의 양성율은 분화성 지방육종에서 11.1%, 점액양 원형세포성 지방육종에서 27.3%, 다형태성 지방육종에서 50.0%, 전체 지방육종에서 25%이었으며, 병리조직학적 유형에 따른 차이가 없었다. Mib-1 양성율은 분화성 지방육종에서 6.6%, 점액양 원형성 지방육종에서 14.7%, 다형태성 지방육종에서 19.5%로서 병리조직학적 유형에 따라 통계학적으로 유의한 차이를 보였다. p53 음성 또는 양성인 그룹과 Mib-1 index간에는 유의한 차이가 있었으며, 이들 상호간에는 양의 상관관계가 있었다. (결론) 지방육종의 조직학적 유형 및 Mib-1 증식지수, p53 양성율은 지방육종의 예후인자로 사용될 수 있음을 시사하였다. Background It is known that the formation of liposarcoma is associated with the mutation of p53 gene and MDM2 gene, and histopathologic subtypes of liposarcoma are related to prognosis of the patient. The study was carried out to investigate a relationship among histopathologic subtypes, p53 mutation, and proliferative rate. Materials and Methods Expression of p53 protein and Mib-1 labelling index by immunohistochemistry in 24 cases of liposarcomas, primarily developed in the abdominal cavity, were invesgated. Result Expression of p53 were observed in 11.1% of well differentiated liposarcoma, 27.3% of myxoid and round cell liposarcoma, and 50% of pleomorphic liposarcoma. There were significant differences among the Mib-1 positive rates according to the histopathologic subtypes. There were significant differences between p53 positive or negative group and Mib-1 index, and there was quantative correlation between them. Conclusion The p53 protein was expressed in 25% of total liposarcoma, especially in the pleomorphic liposarcoma because it was expressed more frequently than other subtypes of liposarcoma(in 2 cases out of 4 cases). The survival rate was markedly decreased in mucinous round cell liposarcoma which has high p53 expression and Mib-1 index. The p53 expression might be a prognostic predictor of liposarcoma.

Jurkat T 세포에 있어서 mizoribine에 의한 세포고사의 신호전달기전 연구

정소환 전남대학교 대학원 2003 국내박사

Mizoribine(bredinini 4-carbamoyl-1-β-D-ribofuranosylimidazolium)은 imidazole계 물질로서 핵산 purine의 합성을 저해하는 대사 길한형 면역억제제이다. 본 연구에서는 mizoribine에 의한 Jurkat T 세포 죽음의 기전을 규명하고자 하였다. Mizoribine은 Jurkat 세포의 생존율을 시간 및 농도 의존적으로 감소 시켰으며, 이때 T 세포의 죽음은 sub-G_o/G₁ 분획 DNA의 증가, 핵산의 분결 및 histone 단백결 H2AX의 인산화 증가 등에 의하여 세포고사 기전에 의해서 매개 되었음 확인할 수 있었다. 이러한 mizoribine에 의한 Jurkat 세포의 세포고사현상은 guanosine의 전처리에 의하여 억제되었다. 세포고사 신호전달분자인 caspase family cysteine proteases의 활성을 측정한 결과 caspase-3 및 caspase-9 protease의 효소적 활성은 대조군에 비교하여 현저히 증가하였으며 caspase-3 protease의 세포내 기질, poly(ADP-ribose) polymeerase(PARP)의 분절이 관찰 되었다. Caspase-9 protease의 활성은 mizoribine이 미토콘드리아 기능에 영향을 주었음을 의미하였으며 이는 미토콘드리아 막전위의 상실과 cytochrome C 의 세포내 방출로 확인되었다. 또한 mizoribine은 미토콘드리아 Bcl-2계 단백질 중 세포고사를 촉진하는 Bcl-X_L 단백질의 발현 감소 및 세포고사를 억제하는 Bcl-X_s, Bak, 및 Bim 단백질의 발현 증가를 유도하였다. Mizoribine에 의한 Jurkat 세포고사에서 변화되는 단백질들의 발현을 2-dimensional(2-D) gel electrophoresis 방법을 이용하여 조사한 결과 300여 개의 spot중 12개의 Spot이 유의한 발현차이를 보였으며, 이중 spot 8개는 발현 감소 그리고 spot 4개는 발현이 증가하여 이들 단백질을 MALDI-TOF를 통하여 규명할 계획이다. 이상의 결과는 mizoribine에 의한 Jurkat 세포의 세포고사는 caspase cysteine protease 활성화 및 미토콘드리아를 경유하는 세포 신호전달기전에 의하여 매개되었음을 시사하였다. Mizoribine (MZR), an inhibitor of IMP dehydrogenase which depletes cellular GTP, is used clinically as an immunosuppressive drug. This study was designed to evaluate the mechanism by which MZR exerts the cytotoxic effect on Jurkat T cells. Here in, the data demonstrated that treatment of MZR decreased cell viability in a dose- and time-dependent manner, MZR-induced cell death was confirmed as apoptosis characterized by chromatin condensation and H2AX phosphorylation. MZR increased the catalytic activity of caspase-3 protease -8 protease and -9 proteases, Activation of caspase-3 protease was further confirmed by degradation of polymerase (PARP), a subtrate of caspase-3 protease by MZR in Jurkat cells. Furthermore, MZR induced the changes of mitochondrial transmembrane potential (MTP) and the cytosolic release of cytochrome C from mitochondria. In addition, MZR induced the decrease of Bcl-X_L expression whereas increase of Bcl-X_s Bak and Bim expression. Guanosine markedly inhibited cell viability and apoptosis with consistent suppression of activity of caspase-8 protease, upstream caspase among caspase family, H2AX phosphorylaion and PARP cleavage in MZR-treated cells. Also, I have screened the expression profile of proteins in Jurkat cells by using two-dimensional (2-D) gel electrophoresis, Among 300 spots resolved in 2-D gels, the comparison of control versus apoptotic cells revealed that signal intensity of 10 spots was decreased and 5 spots was increased. Taken together, the results suggest that MZR functions as an inhibitor of IMP dehydrogenase in apoptosis of Jurkat cells via activation of intrinsic caspase cascades as well as mitochondrial dysfunction.