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Effect of NaCl on the Stability of Oncolytic Vaccinia Virus
Seong-Geun Kim(김성근),Gui Shao Ran(계소연),Hyuk-Chan Kwon(권혁찬),Tae-Ho Hwang(황태호) 한국생명과학회 2016 생명과학회지 Vol.26 No.1
Pexa-Vec (JX-594)은 암특이적 암용해 면역치료제인 백시니아 바이러스이다. 본 연구의 목적은 Pexa-Vec의 안정성을 극대화하기 위한 방법을 개발하는 것이다. 단기안정성 실험에서 바이러스의 활성은 4℃와 실온에서 감소하였으나, 초음파처리와 회전처리로 완전히 회복되었다. Pexa-Vec의 장기안정성 시험은 (A) 30 mM Tris/pH 7.6, (B) 30 mM Tris/pH 8.6, (C) 30 mM Tris/pH 7.6, 150 mM NaCl, 15% sucrose, (D) 30 mM Tris/pH 7.6, 15% sucrose, (E) 30 mM Tris/pH 8.6, 15% sucrose 조건 하에서 수행하였다. 제형 A는 4℃에서 4-8주 후, 실온에서 1주일 후에 2로그 이하로 바이러스활성이 감소되었다. 반면 제형 B의 경우 4℃와 실온에서 바이러스 활성이3일 후 감소되는 것으로 관찰되어 중성 산도가 바이러스 안정성을 유지하는데 필수적이다. 제형A에 15%의 슈크로즈 수크로오스를 추가했을 때(제형D), -20℃, 4℃와 실온에서 바이러스성 안정성이 크게 증가 하였고, 제형 E (pH 7.6)에서 다시 한번 확인되었다. 제형 D (pH 7.6)에 150 mM 염화나트륨을 추가한 제형 C에서 바이러스 안전성을 증가시키는 슈크로즈 수크로오스 효과를 더욱 향상시켜, 4℃와 실온에서 바이러스 활성이 각각 1.5년과 1-2주 동안 유지되는 결과를 보였다. 결론적으로, 우리는 제형C가 항암 백시니아 바이러스를 적절히 저장하기 위한 충분한 조건을 제공할 수 있다고 제안한다. Pexa-Vec (JX-594) is a specific cancer-targeted oncolytic and immunotherapeutic vaccinia virus. The purpose of this study was to develop methods to maximize the stability of Pexa-Vec. In short-term instability testing, viral activity was rapidly decreased both at 4°C and at room temperature (RT), but it was completely restored after sonication followed by vortex. Long-term stability testing of Pexa-Vec in the following liquid formulations was performed: (A) 30 mM Tris/pH 7.6, (B) 30 mM Tris/pH 8.6,(C) 30 mM Tris/pH 7.6, 150 mM NaCl, 15% sucrose, (D) 30 mM Tris/pH 7.6, 15% sucrose, and (E) 30 mM Tris/pH 8.6, 15% sucrose. Viral activity decreased less than 2 log10 at 4°C, and RT was observed in 3 days in B, while viral activity was not decreased even after 4–8 weeks at 4°C and at 1 week in RT in A, suggesting that neutral pH may be essential to maintain virus stability. The addition of 15% sucrose into A (D) significantly increased viral stability at -20°C, 4°C, or RT, and it was also observed at pH 8.6 (E). The addition of 150 mM NaCl into D (C) significantly increased viral stability in addition to the sucrose effect at 4°C or RT. Accordingly, the viral activity in formulation C was maintained for 1.5 years at 4°C, and for 1-2 weeks in RT. In conclusion, we propose that formulation C can provide the most adequate condition for the proper storage of vaccinia oncolytic virus.
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