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- 저자 : Dhirendra Nath Barman(디렌 바르만) (검색결과 1 건)
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Cloning and Characterization of Cellulase Gene (cel5C) from Cow Rumen Metagenomic Library
Min Keun Kim(김민근),Dhirendra Nath Barman(디렌 바르만),Tae Ho Kang(강태호),Jungho Kim(김정호),Hoon Kim(김훈),Han Dae Yun(윤한대) 한국생명과학회 2012 생명과학회지 Vol.22 No.4
한우의 반추위에서 게놈 DNA를 분리하여 메타게놈 은행을 구축한 다음 섬유소분해효소를 암호화하는 유전자를 클로닝 및 유전자를 선별하였다. 선별된 유전자의 DNA 염기서열 및 아미노산 서열을 분석하고 유전산물의 생화학적인 특성을 조사하였다. cel5C 유전자는 1,125 bp로 374개의 아미노산 잔기를 가진 단백질을 암호화하였으며 이 단백질 분자량은 42 kDa이었다. 이 효소의 최적 pH는 4 근방이었으며 최적 온도는 50oC 부근이었다. cel5C 유전자의 internal primer를 사용하여 인공적으로 배양할 수 있는 49종의 반추세균에서 분리한 게놈 DNA을 주형으로 PCR 분석한 결과 해당하는 밴드를 확인할 수 없었다. Cel5C는 현재로서는 배양할 수 없는 반추 미생물로 추정된다. A metagenomic library of cow rumen in the pCC1FOS phage vector was screened in E. coli EPI300 for cellulase activity on carboxymethyl cellulose agar plates. One clone was partially digested with Sau3AI, ligated into the BamHI site of the pBluescript II SK+ vector, and transformed into E. coli DH5 α. We obtained a 1.5 kb insert DNA, designated cel5C, which hydrolyzes carboxymethyl cellulose. The cel5C gene has an open reading frame (ORF) of 1,125 bp encoding 374 amino acids. It belongs to the glycosyl hydrolase family 5 with the conserved domain LIMEGFNEIN. The molecular mass of the Cel5C protein induced from E. coli DH5α, as analyzed by CMC SDS-PAGE, appeared to be approximately 42 kDa. The enzyme showed optimum cellulase activity at pH 4.0, and 50℃. We examined whether the cel5C gene comes from the 49 identified cow rumen bacteria using PCR. No PCR bands were identified, suggesting that the cel5C gene came from the unidentified cow rumen bacteria.
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