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치즈 제조 부산물을 이용한 ELISA Blocking Agent의 개발에 관한 연구
유제현,송진욱,조흥찬,차광종,박범석,김응률,이종익,이중복,谷口孝喜 건국대학교 동물자원연구센터 1999 動物資源硏究誌 Vol.20 No.-
본 연구는 유청과 탈지분유를 blotto로 이용하여 ELISA 수행시 항원·항체반응에 비특이반응을 막는 Blocking agent를 탐색하기 위해 실험을 수행했다. MAb의 역가측정 결과 유의차가 인정되는 OD값이 0.3이상 검색된 희석배율은 1B2의 경우 819,200배, 6D4의 경우 1,638,400배, 15B10의 경우 204,800배이었다. 서로 다른 Blotto가 항원·항체반응에 미치는 영향을 각기다른 MAb를 이용하여 조사해 본 결과 MAb Yo-156, Yo-5는 Blocking agent로 표준적으로 사용하고 있는 BAS가 비교하여 group A 바이러스 7종 모두에 비슷한 정도의 발색을 일으켰으며, MAb G6는 G6 type바이러스 4종 모두에서 비슷한 정도의 발색을 일으켰고, MAb G10은 G10 type 바이러스 3종 모두에서 비슷한 정도의 발색을 일으켰다. 따라서 본 실험에 사용한 모든 종류의 blotto소재인, 탈지분유1(서울우유(협)), 탈지분유2((주)매일유업), 혼합탈지분유((주)매일유업), whey powder1(Sigma), whey powder2 ((주)삼익유가공), WPC34((주)환이상사), WPC800((주)후드피아), WPC8000 ((주)후드피아), WPI((주)환이상사)는 현재 Blocking agent로 사용하고 있는 BSA와 비교하여 유사하게 비특이 반응을 막아주는 것으로 밝혀져 경제적으로 보다 저렴한 blotto 소재로 이용이 가능하다는 사실을 확인하였다. Enzyme-Linked-Immuno-Sorbent-Assay (ELISA) has been frequently used for detection of interaction of antigen and antibody. Many efforts have been made to reduce nonspecific reaction of ELISA. Bovine serum albumin (BSA) is usually used for blocking the nonspecific reaction even thought it is expensive. Recently skin milk has been focused on blocking nonspecific reaction of ELISA. This study aimed to substitute expensive blocking agent of ELISA with cheap by-product of cheese manufacture. To evaluate the substitution of BSA with wheys made in different companies, ELISA was carried out using monoclonal antibodies (MAbs) against rotavirus. The blocking capacity of the whey was compared with that of the BSA. The commercial wheys showed the same activity as BSA when ELISA was performed using MAb YO-156, S2-37, and Yo-5. To further investigate whether the whey affects the detection specificity of MAb, the ELISA was carried out using type specific MAbs. MAb G6 specific to serotype G6 bound to only rotavirus serotype G6 such as NCDV, UK, JBR, and Jedong strain whereas MAb G10 specific to serotype G10 bound to serotype G10 rotavirus only, demonstrating that the whey a and no effect on the binding specificity of MAb with respect to antigen-antibody reaction. These data indicate that the whey may have no effect on specific interation of antigen-antibody and may be widely used for blocking substitute because of competitive priority of its price.
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