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이경훈(Kyung Hoon Lee),정동효(Dong Hyo Chung),김성산(Seong San Kim),송윤호(Youn Ho Song),김우연(Woo Yeon Kim) 한국응용생명화학회 1995 Applied Biological Chemistry (Appl Biol Chem) Vol.38 No.1
Soybean nuclear extracts were prepared to detect SEF3(soybean embryo factor 3), which is presumed to be a trams-acting factor for the expression of the soybean β-conglycinin α` subunit gene. To increase the specific activity of DNA probe during labeling with [α-^(32)P]dATP, dATP was added to a final concentration of 1.1 mM during the chase reaction. It results in approximately four-fold increase of specific activity of the DNA probe. Effects of several modifications in preparation of soybean nuclear extracts were examined. It was found that glycerol is effective to stabilize SEF3 during the preparation of nuclear extracts and polyethylenimine could be used to increase the specific activity of SEF3 in nuclear extracts.
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Effect of the Extraction Method on the Soybean Embryo Factor 3 Activity
Kim,Woo-Yeon,Kim,Seong-San,Chung,Dong-Hyo,Lee,Kyung-Hoon,Song,Youn-Ho 中央大學校 遺傳工學硏究所 1993 遺傳工學硏究論集 Vol.6 No.1
본 실험에서는 대두 β-conglycinin의 α'subunit 유전자의 발현에 관여하리라 생각되는 대두 배 인자 3의 역가를 함유하는 대두 핵 추출물 조제 방법에 대하여 조사하였다. 역가 조사를 위한 DNA의 표지반응 후에 추가로 1mM dATP를 첨가하여 반응을 지속한 경우가 첨가하지 않은 경우보다 2배 높은 방사능 역가의 DNA 탐침을 얻을 수 있었다. 이러한 DNA 탐침을 이용하여 핵 추출물 조제방법에 따른 대두 배 인자 3의 역가를 gel mobility shift assay로 조사한 결과, 조제 중 glycerol의 첨가가 배 인자 3의 역가를 안정화시켰고, polyethylenimine을 이용한 대두 핵 추출물 조제법이 배 인자 3의 비역가를 증가시키는 데 이용될 수 있음을 알 수 있었다. Soybean nuclear extracts were prepared to detect SEF3(soybean embryo factor 3), which is presumed to be a trans-acting factor for the expression of soybean β-conglycinin α' subunit gene, in gel mobility shift assay using the DNA probe containing two AACCCA hexanucleotides. To increase the specific activity of DNA probe during labeling with [α-32P]dATP, dATP was added to a final concentration of 1.1 mM during the chase reaction. It results in twofold increase of specific activity of the DNA probe. The effects of several modifications in preparation of soybean nuclear extracts were examined. It was found that glycerol is effective to stabilize SEF3 during the preparation of nuclear extracts and polyethylenimine could be used to increase the specific activity of SEF3 in nuclear extracts.
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