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- 저자 : 桑潤滋 (검색결과 3 건)
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정장용,박희성,桑潤滋,離素娟 진주산업대학교 농업기술연구소 1998 農業技術硏究所報 Vol.11 No.-
본 연구는 도살장에서 도살되는 한우의 난소를 적출하여 난소로부터 미성숙 난포란을 회수하는데 있어서 계절별 난포란의 quality과 수정율의 차이점에 대한 규명과 체외성숙-체외수정한 난자를 체외배양기법을 확립하고자 본 실험을 수행하였다. 도살된 한우의 난소로 부터 난포의 크기별로 난포란을 회수하여 체외성숙을 유도하였다. 체외성숙란을 정소상체 미부정자를 이용하여 체외수정을 시킨 후 난관상피세포에서 공배양을 실시하여 수정란의 체외발달을 유도하였으며, 난포란의 계절별 회수율, 체외수정율 및 배양체계에 따른 체외발달율을 조사한 결과는 다음과 같다. 봄(426개), 여름(433개), 가을(419개) 및 겨울(428개) 등 계절별로 분류하여 모두 1,706개의 난소로부터 14,674개의 난포란을 채취하였다. 계절에 따른 1등급 회수율은 22.2(봄), 6.5(여름, 20.6(가을) 및 18.1%(겨울)로써 이들간에 유의적(P<0.05)인 차이는 없었으나 겨울철에 회수한 난자들이 다소 낮게 나타났다. 회수된 2등급 난자의 비율도 봄, 여름, 가을 및 겨울이 각각 43.7, 41.6, 44.1 및 35.2% 로써 계절에 따른 유의적(P<0.05)인 차이가 없었다. 봄, 여름, 가을 및 겨울 등 계절별 체외수정율은 각각 76.0, 80.6, 75.7 및 72.1% 로써 계절에 따른 수정율은 유의적(P<0.05)인 차이가 없었으며, 배반포기 단계까지 발달한 체외수정란은 TCM-199 및 Hams-F10 배양액에 10% FCS와 난관상피세포를 공배양을 실시하였을때는 각각 23.3 및 21.7%의 발달율을 보였으나, TCM-199 배양액에 10%FCS만을 첨가하였을 때는 전혀 발달이 되지 않았다(P<0.05). 본 연구에서는 계절별 회수율의 차이는 많은 요인이 있을 수 있겠으나 주로 계절별 사양관리의 차이 및 계절에 따른 조사료의 공급수준에 의한 영양수준의 차이 등에서 기인되는 것으로 생각된다. 체외수정란의 배반포기로의 발달을 위한 배양조건은 TCM-199 또는 Hams-F10배양액에 10% FCS를 첨가한 배양액으로 난관상피세포와 공배양을 실시하는 것이 효과적인 방법이라고 생각된다. The present study was carried out to determin the seasonal effects of oocyte collection and culture condition of Korean native cows and in vitro developmental rate of 1VF bovine embryos. The follicular oocytes were collected from small, medium and large follicles, and classified into 4 grades by the morphology of cumulus cells attached and homogenous cytoplasm. They were fertilized in vitro by epididymis spermatozoa treated with heparin for 24 hrs., and then the zygotes were co-cultured in vitro with bovine oviductal epithelial cells for 7 to 9 days. The results obtained were summarized as follows : The follicular oocytes recovered were classified into grade I 22.2% as spring, 26.5% as summer, 20.6% as autumn and 18.1% as winter. The cleavage rates of the embryos obtained from 76.0(spring), 80.6(summer), 75.5(autumn) and 72.1(winter) respectively(P<0.05). The developmental rates(23.3 and 21.6%)of embryos cultured in TCM 199+10% FCS-OCEM and Harms-F10+10%FCS+OECM up to blastocyst stage were higher(P<0.05) than the TCM-199+10%FCS culture condition(P<0.05)
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정장용,박희성,桑潤滋,離泰娟 진주산업대학교 농업기술연구소 2000 農業技術硏究所報 Vol.13 No.-
The present study was conducted to improve the efficiency of nuclear transplantation with in vitro produced oocytes and embryos in Korean native cows. The optimal conditions and procedures of in vitro maturation(IVM), in vitro fertilization(IVF), in vitro culture(IVC), electrofusion and nuclear transplantation(NT) of bovine oocytes were evaluated. The optimal condition for electric fusion of injected blastomeres with enucleated oocytes was determined following NT in IVM oocytes. The higher fusion rate was achieved when single DC electricity was applied at the voltage between 1.0kV/cm, for the duration of 30∼60 μ sec to the oocytes aged at 28∼32 hours of IVM. The development in vitro to blastocyst of the fused embryos of 30 μsec, 0.5-1.0 kV/cm(5.7-4.2%) was similar to the result from the 60 μsec, 0.5-1.0ikV/cm(4.8-5.6%), and not significantly different between the electric fields. To improve the productivity of cloned embryos by NT in Korean native cows. The in vitro developmental rate of donor nuclei following NT and fusion was enhanced from 4.6%(8∼6-cell) and 2.7%(32∼64-cell). The number of blastomeres was significantly(P<0.05)reduced in the nuclear transplanted embryos(65.3±4.7), compared with the IVF embryos(112.8±6.2).
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정장용,박희성,홍승표,김정혁,桑潤滋,離素娟 진주산업대학교 농업기술연구소 1999 農業技術硏究所報 Vol.12 No.-
본 연구는 수정란의 동결기법을 확립하고자 배반포기에 있는 한우 체외수정란을 이용하여 유리화 및 직접이식 동결방법으로 동결을 실시하여 동결·융해후 생존성, 동해방지제의 종류, 평형 및 할구의 손상여부 등에 대한 영향을 조사한 결과는 다음과 같다. 유리화 동결방법중 GESD-VS와 EFS 용액을 동해방지제로 사용하였을 때 동결·융해 수정란의 생존율은 각각 69.8 및 37.3%로써 이들간에 유의적(P<0.05)인 차이가 있었으며, 동결기를 이용한 직접이식 동결법은 생존율이 56.0%로써 유리화 동결방법과는 유의적(P<0.05)인 차이가 없었다. 동결·융해후 생존한 수정란의 발달율은 GESD-VS용액을 사용하였을때가 53.4%로써 EFS용액을 사용하였을때의 24.0%보다는 유의적(P<0.05)으로 높게 나타났다. 1 및 2단계 평형시 단계별 생존율은 각각 11.7 및 23%로써 이들간에 유의적(P<0.05)인 차이가 없었으며, 동결·융해 수정란의 발달율도 각각 10 및 16.8%로써 평형방법간에 유의적(P<0.05)인 차이가 없었다. 신선수정란, 유리화 동결수정란 및 동결비를 이용한 직접이식 동결법으로 동결하였을 때 동결·융해 수정란의 할구수는 각각 98.7±2.3개, 69.1±2.6 및 84.2±2.7개로써 동결방법들간에 유의적(P<0.05)으로 할구수의 차이가 많았다. This study was carried out to investigate the effect of cryoprotectants, equilibration step, number of blastomeres on survival and developmental rates of bovine in vitro fertilized blastocysts(Korean native cattle) frozen/thawed by vitrification and frozen for direct transfer(1.8M ethylene glycol). The bovine oocytes were collected from 2-5mm follicles, matured for 24hrs in 5% CO_2 incubator and then fertilized with cauda epididymis sperm. Blastocyst at day 7-9 ater IVF were frozen in vitrification and frozen for direct transfer(1.8M ethylene glycol). Survival and developmental rates of frozen-thawed IVF embryos were examined. The results were as follow ; The survival rate of IVF blastocyst after vitrification in GESD-VS, EFS and 1.8M ethylene glycol solution were 69.8, 37.3 and 56.0%, respectively(P<0.05). When equilibrated in 1 step(11.7%) was similar to the result from 2 step(23.0%), and no significantly(P<0.05) different between the equilibrated steps. The number of blastomere at blastomere at blastocyst of bovine embryos frozen/thawed in fresh, vitrification and freezing for direct transfer were 98.7±2.3, 69.1±2.6 and 84.2±2.7, respectively, and were significantly(P<0.05) different between the freezing methods.
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