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- 발행기관 : Graduate School of Medicine Chungnam National Univ (검색결과 1 건)
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권유빈 Graduate School of Medicine Chungnam National Univ 2006 국내석사
Sphingosine -1- phosphate (S1P) 같은 sphingolipid metabolite는 생물체에 작용하는 molecule로써 세포의 성장과 분화, 생존을 조절한다. 이러한 S1P는 Sphingosine에서 Sphingosine kinase에 의해 활성화 되고 세포내의 Ca2+ 한다. 우리는 keratinocyte의 differentiation을 조절할 수 있는 Sphingosine kinase activator를 찾기 위해서 7가지 novel한 compound를 합성하고 keratinocyte differentiation 효과가 있는지 테스트했다. 또한, Sphingolipid의 일종인 Sphingosylphosphorylcholine (SPC)도 세포내 Ca2+을 증가시킨다는 보고에 따라 keratinocyte에서는 어떤 효과가 있는지 같이 테스트 했다. 먼저 SK activator의 효과를 알아보기 위해서 HaCaT keratinocyte에 몇가지 SK activator 후보 물질을 처리한 다음 total RNA를 추출하고 involucrin, keratin1같은 몇가지 keratinocyte differentiation marker로 gene발현양상을 보았다. 또한, 효과적인 스크리닝 방법으로 세포내 Ca2+intensity를 측정해서 직접적인 효과를 관찰하고 MTT assay를 통해 농도별 세포독성 양상을 알아보았다. 그 결과 3가지 compound(K6PC-4, K6PC-5, and K6PC-9)에서 농도와 시간에 따라 HaCaT keratinocyte의 differentiation을 유도하는 것으로 나타났다. 한편, 우리는 Boyden's chamber assay를 통해서 선택한 compound를 처리했을 때 migration에 영향을 미치는지도 알아보았다. 그러나 K6PC-4, K6PC-5, K6PC-9는 S1P와 SPC에 비해서 keratinocyte의 migration에는 아무런 효과가 없었다. 또한, 우리는 선택한 SK activator가 농도별로 in vivo상에서 얼마만큼의 differentiation효과가 있는지 알아보기 위해서 3차원 skin equivalent를 만들어 테스트했다. 다음으로 K6PC-4, K6PC-5, K6PC-9의 signal pathway를 알아보기 위해서 p42/44, p38, pJNK의 발현양상을 알아보았다. 이상으로 Novel한 Sphingosine kinase activator인 K6PC-4, K6PC-5, K6PC-9는 keratinocyte의 differentiation에 효과가 있는 것으로 결론을 내릴 수 있었고 이러한 기능을 atopic dermatitis에 적용할 수 있을 것으로 보여진다.
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