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- 저자 : Heon-Jin Lee(이헌진) (검색결과 3 건)
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MiR-24 Simultaneously Regulates Both Oxytocin and Vasopressin
Heon-Jin Lee(이헌진) 한국생명과학회 2019 생명과학회지 Vol.29 No.1
옥시토신(Oxt)과 바소프레신(Avp)은 주로 시상하부의 신경세포에서 생성이 되어 뇌하수체 후엽에서 온 몸으로 분비된다. 유전자 구조와 염기서열 연구를 통해 옥시토신과 바소프레신이 진화적으로 발달되는 단계에서 유전자가 염색체 내에 중복된 것으로 추정되어져 왔다. 이전 연구에서 작은 조절자로 알려진 마이크로RNA 중 하나인 miR-24가 옥시토신과 직접 결합한 후 조절할 수 있다는 사실을 본 연구실에서 발표한 바가 있지만, 바소프레신을 동시에 조절할 수 있는지는 확실치 않았다. 본 연구에서 바소프레신을 조절할 수 있는 후보 마이크로RNA를 생물정보학적 방법으로 탐색하였다. 여러 후보 중 miR-24만이 바소프레신과 직접 결합할 수 있음을 형광 리포터 분석과 바소프레신 결합부위의 돌연변이 cDNA 제작을 통해 밝혀내었다. 바소프레신의 miR-24 결합 필수 부위인 “seed” 부분을 돌연변이 시킨 바소프레신의 경우 miR-24와의 결합능이 현저히 떨어지고 miR-24의 저해제 역시 결합능을 감소시키는 것을 보아 miR-24가 바소프레신에 결합하여 조절할 수 있음을 명확히 할 수 있었다. 이러한 결과를 종합해 볼 때 단일 마이크로RNA가 두 주요한 뇌하수체 호르몬의 조절에 관여한다는 새로운 조절 기전을 제시하여 준다. Oxytocin (Oxt) and vasopressin (Avp) are mainly synthesized in neuronal cells of the hypothalamus and are released from the posterior pituitary. The structure and sequences of Oxt and Avp genes imply that they are closely related and that they are the result of a duplication event during evolution. A previous study suggested that a small regulatory microRNA (miRNA), miR-24, regulated Oxt after binding. However, it is not clear whether this miRNA can modulate Avp simultaneously. The aim of the present study was to investigate putative targeting miRNAs of Avp, including miR-24. Targeted candidate miRNA oligonucleotides were transfected into COS-7 cells to elucidate the binding activity of miRNAs and Avp using dual-luciferase assays. The luciferase assay showed that only miR-24 displayed elevated binding activity with Avp as compared to a control and other candidate miRNAs. Transfection with seed mutants of Avp and miR-24 inhibitors clearly showed that miR-24 can directly bind to the Avp gene. These results provide new insight into the regulatory mechanism of neurohypophysial hormones by a single miRNA.
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Identification and analysis of microRNAs in Candida albicans
Jin-Hyun Cho(조진현),Heon-Jin Lee(이헌진) 한국생명과학회 2017 생명과학회지 Vol.27 No.12
Candida albicans에 의한 구강 감염(캔디다증)은 구강 점막에 빈번하게 발생하며 잘 알려진 질병이다. 구강 캔디 다증은 생명을 위협하는 정도의 곰팡이 감염증은 아니나, 특정상황에서 개인에게 심각한 위험을 초래할 수도 있다. 마이크로 RNA는 세포 내에서 다른 타겟 유전자를 저해하는 작은 크기의 RNA 분자이며 단백질을 코딩하지는 않고 번역과정을 억제하는 조절자로서의 역할을 하고 있다. 본 연구는 C. albicans의 마이크로RNA를 처음으로 동정하고 그러한 마이크로RNA가 지닌 기능을 조사하기 위함이다. 이를 위하여 C. albicans의 small RNA를 차세대 염기분석법을 통하여 분석하고 그러한 RNA들의 2차 구조를 생물정보학적 방법으로 조사하였다. 분석한 small RNA들은 마이크로 RNA라고 불리울 수 있는 특징들을 가지고 있었으며, 특별히 높게 발현되고 있는 두개의 마이크로 RNA 정도 크기의 RNA가 CBP1 유전자의 3’ 말단 비번역구역(UTR)에서 반대방향으로 발현하는 것을 밝혀내었다. 우리는 이러한 C. albicans의 RNA가 CBP1 유전자를 타겟으로 하여 조절하는지 알아보기 위해 RNA를 인위적으로 합성한 후 세포 내로 주입하고, 형광형미경으로 도입 사실을 확인하였다. 하지만 4시간과 8시간 후에 CBP1의 발현 변화는 관찰되지 않았다. 따라서, 이러한 결과는 C. albicans가 마이크로RNA에 의한 RNA 간섭(RNAi) 작용이 다른 진핵세포와는 다르게 작용하는 것을 알 수 있다. Oral infection due to Candida albicans is a widely recognized and frequent cause of superficial infections of the oral mucosa (oral candidiasis). Although oral candidiasis is not a life-threatening fungemia, it can cause severe problems in individuals under certain conditions. MicroRNAs (miRNAs) are noncoding, small RNA molecules, which regulate the expression of other genes by inhibiting the translation of target mRNAs. The present study was designed to identify miRNAs in C. albicans and determine their possible roles in this organism. miRNA-sized small RNAs (msRNAs) were cloned in C. albicans by deep sequencing, and their secondary structures were analyzed. All the cloned msRNAs satisfied conditions required to qualify them as miRNAs. Bioinformatics analysis revealed that two of the most highly expressed C. albicans msRNAs, Ca-363 and Ca-2019, were located in the 3" untranslated region of the corticosteroid-binding protein 1 (CBP1) gene in a reverse orientation. miRNA mimics were transformed into C. albicans to investigate their RNA-inhibitory functions. RNA oligonucleotide-transformed C. albicans was then observed by fluorescent microscopy. Quantitative PCR analysis showed that these msRNAs did not inhibit CBP1 gene expression 4 hr and 8 hr after ectopic miRNA transformation. These results suggest that msRNAs in C. albicans possess an miRNA-triggered RNA interference gene-silencing function, which is distinct from that exhibited by other eukaryotic systems.
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miR-7b Promoter Contains Negative Gene Elements
Ji-Woong Choi(최지웅),Heon-Jin Lee(이헌진) 한국생명과학회 2011 생명과학회지 Vol.21 No.12
전형적인 마이크로 RNA는 주로 해당 마이크로RNA의 호스트 유전자와 동시에 발현하는 형상을 보인다. 마이크로RNA miR-7b와 그 호스트 유전자인 FICT는 유전자 발현 조절부위인 프로모터를 함께 공유할 것으로 추정되며, 이는 이 유전자들의 뇌 특이적인 발현 양상에 기여할 것으로 추정된다. 바이오인포메틱 방법을 이용하여 사람과 마우스의 miR-7혹은 miR-7b의 프로모터 부위가 상호 유사성을 가짐을 확인하였고, 이 부위에 다양한 전자조절 부위가 있는 것을 확인 하였다. 또한 이 가설을 증명하기 위하여 형광발현 리포터 유전자 시스템을 사용하여 형광발현 벡터에 마이크로 RNA miR-7b와 그 호스트 유전자인 FICT의 5’ 전부위를 클로링하여 프로모터의 활성정도를 다양한 세포주에서 확인하였다. 이 결과를 통하여 마이크로 RNA와 그 호스트 유전자인 FICT의 프로모터에는 네거티브 유전자 조절인자를 포함하는 것을 확인 할 수 있었다. The typical miRNA and its nearby host gene are co-expressed by sharing the same promoter. We assumed that miR-7b and its host gene FICT might use an identical promoter for their brain specific gene expression. Sequence comparison of the genomic DNA of mouse miR-7b, human miR-7-3 and their host genes by using the bioinformatic tools revealed high sequence homology and several putative transcription factor-binding sites on the promoter region. In order to probe the hypothesis we used a luciferase vector system into which we cloned the 5’ upstream conserved region of miR-7b and FICT. The putative promoter region showed decreased luciferase activity, suggesting that the 5’ upstream of miR-7b and FICT contain a negative regulator for gene expression.
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