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Resazurin(alarmar Blue™)을 이용한 효과적인 in vitro 항비듬력 즉정법
박병덕 ( Byeang Deog Park ),흥선영 ( Seon Young Hong ),정세규 ( Sekyoojeong ),조인식 ( In Sik Jo ),구형서 ( Hyeong Seo Gu ),한일민 ( Ii Min Han ),이상명 ( Sang Myeong Lee ),이완규 ( Wan Kyu Lee ) 대한화장품학회 1999 대한화장품학회지 Vol.25 No.3
Resazurin(alarmar Blue™)을 이용하여 in vitro 적으로 P. ovale의 최소 발육저지농도 (Minimum Inhibitory Concentration ; MIC)률 측정함으로써 여러 가지 조성의 항비듬제의 항비듬 효과를 측정하고자 하였다. 최적의 실험 조건을 결정하기 위한 기초 실험 결과, 약 2.6 X 105cfu/Mℓ 이상의 농도로 P. ovale가 주입되는 경우 alarmar Blue™ 흡광도의 변화률 정확하게 관찰할 수 있었고, alarmar Blue™ 자체의 희석 배율이 1:1 ~ 1:4 이며,16시간과 24 시간 배양을 하여야 비교적 정량적인 결과를 얻을 수 있었다. alarmar Blue™가 균체의 증식에 미치는 영향을 고찰하여 본 결과 1:1 의 희석 용액에서도 alarmar Blue™가 균체의 증식에 영향을 미치지 못함을 알 수 있었다. Zinc pyrithione과 Climbazole의 혼합계에서 항비듬 효과를 관찰하여 본 결과 일정 혼합비에서 효과적인 항비듬 효과를 관찰할 수 있었고, 현미경 관찰에 의한 MIC 측정 법과, SDDM(Skin-Disk Diffusion Method) 법에 의한 항비듬 효과와 비교하여 본 결과 유사한 경향성을 관찰할 수 있었다. 이상의 결과를 종합해 볼 때 alarmar Blue™를 사용한 in vitro 항비듬 효과 측정법은 시료나 배지의 탁도에 크게 영향을 받지 않으며, Micro-plate reader를 사용함으로써 많은 종류의 시료에 대한 결과를 빠르고 정확하게 얻을 수 있다는 장점을 가지고 있으므로, 향후 효율적인 in-vitro 항비듬 평가 방법으로 활용이 기대된다. We have tried to measure the anti-dandruff effect of the several kinds of formulations by determining the MIC values of the P. ovale which was determined by resazurin(alarmar Blue™). To get high reproducibility, it was suggested that about 2.6 X 105cfu/mℓ of P. ovale should be incubated with alarmar Blue™, optimum dilution ratio between alarmar Blue™ and PBS buffer should be 1:1 - 1:4, and oplimam incubation time should be 16 ~24 hours. Even though 1:1 diluted alarmar Blue™ was incubated with P. ovale,the metabolic activity of P. ovale was not inhibited by alarmar Blue™. The Minimum Inhibitory Concentration(MIC) values of several kinds of anti-dandruff formulation which were the mixture system between Zinc pyrithione and Climbazole make it possible to determine the optimal anti-dandruff formulation, which show similar results with that of microscopic MIC determination and that of SDDM(Skin-Disk Diffusion Method). It is expected that the anti-dandruff test method which uses alarmar Blue™ could be used as an effective in vitro test method because it was not so much affected by the turbidity of the broth and samples, and it can afford the MIC values of many samples within relatively short time by using microplate reader.
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