http://chineseinput.net/에서 pinyin(병음)방식으로 중국어를 변환할 수 있습니다.
변환된 중국어를 복사하여 사용하시면 됩니다.
Loop-mediated Isothermal Amplification(LAMP) 법을 이용한 Kakugo Virus의 검출법 개발
이중구,윤병수 경기대학교 사회과학연구소 2012 경기대학교 기초과학논문집 Vol.25 No.1
Kakugo Virus(KV) is a picorna-like virus that was originally identified in the brains of aggressive but apparently healthy worker honeybees(Apis mellifera L.). A loop-mediated isothermal amplification (LAMP) assay allows one-step detection of gene amplification without expensive equipment such as thermocycler. In this study, new LAMP method for the specific detection of KV in honeybee was developed (KV-LAMP). A set of four designed primers named KV-F3 / B3 / FIP / BIP that recognize KV sepcific sequence(GenBank, 250362.1). After optimization of conditions, KV-LAMP specific amplification was successfully performed using KV-LAMP from standard DNA sequence. KV-specific template was amplified under isothermal conditions at 59℃ within 60 minutes by KV-LAMP. The method could be detected KV from DNA clone at 1×102copies/㎕, also could be applied not only cDNA but also field samples. Especially, this method was developed direct detection by the naked eye using SYBR Green Ⅰ and Gene-Finder™ Nucleic acid fluorescent dye. In conclusion, KV-LAMP may be a useful method for the detection Kakugo Virus from the field. Kakugo Virus(KV)는 외관상으로는 건강하지만 공격적인 성향을 나타내는 일벌의 뇌에서 분리된 picorna virus 계열의 것이다. LAMP는 thermocycler 같은 고가의 장비없이도 유전 자를 증폭할 수 있는 등온증폭방법으로, 본 연구에서는 쉽고 빠르게 KV를 진단할 수 있는 KV-LAMP법을 개발하였다. KV의 특이적인 염기서열(GenBank, AB250362.1)에 근거한 KV-F3 / B3 / FIP / BIP, 4개의 primer를 사용하여 59℃의 등온조건하에서 60분간 정치하여 DNA가 성공적으로 증폭됨을 확인하였다. 1×102copies/㎕까지 증폭이 가능하며 실제 꿀벌에서도 검출가능함이 확인되었고, SYBR GreenⅠ과 Gene-Finder™ Nucleic acid fluorescent dye를 사용하여 전기영동 없이 육안으로 관찰할 수 있었다. 따라서 KV-LAMP 법을 통하여 KV를 신속하고 정확하게 검출함으로써 현장에서 유용하게 적용될 수 있을 것 으로 사료된다.