양철학 교수 실험실

양철학 생화학분자생물학회 1990 생화학분자생물학회 소식 Vol.10 No.2

기초과학 연구분야에 더 많은 연구비를 책정하라

양철학 한국미생물학회 1987 微生物과 産業 Vol.13 No.2

박사과정의 활성화를 위해서 기초과학 연구의 지원이 대폭증가되어야 하겠고, 기초과학 발전의 원동력이 되는 박사과정및 박사후 과정 훈련의 내실을 다지는 여러제도가 시급히 정착되어야 하겠다고 본다. 우리나라의 기초과학 진흥은 이제 이를 역설하는 단계를 훨씬 지났고 빨리 선진국 수준의 시설, 제도및 재정적 뒷바침이 없이는 생물공학을 위시한 첨단산업 분야에서 크게 낙후하게 될 뿐 아니라 국가 민족의 장애에 큰 어려움을 주게 될 것으로 본다.

황소정자의 β - N - Acetyl - D - Glucosaminidase 의 정제와 성질 등전초점화에 의한 여러 형의 효소들의 확인

양철학,이희영 ( Chul Hak Yang,Hee Yong Lee ) 생화학분자생물학회 1981 BMB Reports Vol.14 No.4

β-N-Acetylglucosaminidase, a lysosomal enzyme, has been purified 430 folds from the 105,000 × g supernatant of bull semen, This partially purified enzyme was further subdivide3 into six different components by isoelectric focusing column having pI value of 3.2 (I), 5.8 (II), 6.25 (III). 6.78 (V), and 8.30 (VI). Fractions, II, III, and IV contained both β-N-acetylglucosaminidase and β-N-acetylgalactosaminidase activities but the others had only β-N-acetylglucosaminidase activity. Fraction II was completely inactivated by incubation at 50° for 3 hr (pH 4, 4) indicating a B form of enzyme, The partially purified enzyme showed one major band and a minor band on disc gel electrophoresis, The molecular weight of the β-N-acetylglucosaminidase from bull sperm was 240, 000 by gel filtration. The bull sperm enzyme had multiple pH optima in the range of pH 3.0∼5.3.

대장균 ada 돌연변이에 대장균 K12 의 ada 유전자의 클로닝

양철학,백영진,정선호 생화학분자생물학회 1991 BMB Reports Vol.19 No.3

An Escherichia coli ada mutant, I-27, was isolated by N-methyl-N'-nitro-Nnitrosoguanidine (MNNG) treatment. This mutant showed increased sensitivity to simple alkylating agents such as MNNG and methyl-methanesulphonate (MMS) and was unable to induce the adaptive response to MNNG. The I-27 was defective in inducing activities of O^6-methylguanine methyltransferase and 3-methyladenine DNA glycosylase II. The ada^+ gene was cloned from wild type E. Coli K12 by ligating bacterial DNA partially digested with PstI into pBR322. The recombinant plasmid, obtained above, gave MNNG resistance to ada mutant, I-27, and resulted in the constitutive synthesis of methyltransferase. Further subcloning of pEMTI was achieved by ligating a Hind III digest of pEMT1 into pBR322 and transforming it into the I-27, an ada mutant. The resultant recombinant plasmid, pEMT2, contained a 3.1 kb Hind III fragment of the pEMTl DNA.

단백질공학의 원리와 그 전략

양철학 한국미생물학회 1988 微生物과 産業 Vol.14 No.1

단백질 공학의 기본원리와 어떠한 연구방법이 이용되는가 또는 필요한 여러 연구결과를 어떻게 상호연계 시키므로 가장 효과적인 단백질변형이 가능한지를 다루어 보려고 한다.

대장균에서 3-methyladenine 및 $O^6$-methylguanine을 절단 제거하는 DNA Glycosylase들에 관한 연구

양철학,Yang, Chul-Hak 생화학분자생물학회 1986 한국생화학회지 Vol.19 No.1

Two enzymes which release 3-methyladenine and $O^6$-methylguanine was highly purified from E. coli, BW9062 which lacks Endonuclease I and Exonuclease III and designated as 3-methyladenine DNA glycosylase and $O^6$-methylguanine DNA glycosylase respectively. These two enzymes was purified by using DNA-cellulose column chromatography. The 3-methyladenine DNA glycosylase was further separated to two isoenzymes with isoelectricfocusing column showing pI value of 6.0 and 7.7. 3-Methyladenine DNA glycosylase having pI value of 7.7 released mainly 3-methyladenine. The other 3-methyladenine DNA glycosylase having pI value of 6.0 released both 3-methyladenine and 7-methylguanine. The 3-methyladenine DNA glycosylase and $O^6$-methylguanine DNA glycosylase can be separated with phosphocellulose column. $O^6$-methylguanine DNA glycosylase was identified by using isoelectric focusing column but was highly labile. Endonuclease I과 Exonuclease III가 없는 E. Coli균주 BW9062에서 3-methyladenine과 $O^6$-methylguanine을 제거하는 두 효소를 상당히 높은 순도로 정제하고 이들을 각각 3-methyladenine DNA Glycosylase 및 3-methyladenine과 $O^6$-methylguanine을 DNA Glycosylase라고 명명했다. 이 두 효소는 DNA-Cellulose Column을 사용하여 분리하였다. 그리고 3-methyladenine DNA glycosylase는 Isoeletric focusing column을 사용했을때 pI 값이 6.0과 7.7인 두 형태의 효소로 더욱 분리되었다. pI 7.7에서 얻은 3-methyladenine DNA glycosylase는 3-methyladenine만 주로 배출하고 pI 6.0에서 얻어진 효소는 3-methyladenine 및 7-methylguanine을 배출하였다. 3-methyladenine DNA glycosylase와 $O^6$-methylguanine DNA glycosylase를 Phosphocellulose column을 사용하여 분리할 수 있었다. $O^6$-methylguanine DNA glycosylase는 Isoelectric focusing column에 의해 재확인할 수 있었으나 대단히 불안정 하였다.

A Study on the Active site of Glucoamylase from Aspergillus shirousamii

양철학,Lee, Kuly Dong,Yang, Chul-Hak 대한화학회 1989 Bulletin of the Korean Chemical Society Vol.10 No.1

Glucoamylase was inactivated with 1-ethyl-2-(dimethylaminopropyl)carbodiimide (EDC) at pH 5.0. Time course of inactivation of glucoamylase was at least biphasic. From the results of the titration of SH groups with Ellman's reagent and hydroxylamine treatment at pH 7.0, it was concluded that the crucial sites of modification were carboxyl groups of glucoamylase. The CD spectrum of EDC-modified glucoamylase suggested that the gross conformation of the native enzyme was retained. The inactivation of glucoamylase was reduced remarkably in the presence of maltose. The logarithm of the half-life of the inactivation of glucoamylase by EDC was a linear function of log[EDC] in each stage indicating that one carboxyl group among the modified ones was crucial for inactivation of glucoamylase. The change in the binding affinity due to modification was determined by using an affinity column. It indicates that the carboxyl group of glucoamylase seems to play a role in both, the catalysis and substrate binding in the first stage, but in the second stage the binding affinity is recovered almost up to that of native enzyme.

황소의 정액에서 베타-굴룩 유로니다아제의 정제 및 그 성질에 관한 연구

양철학,이희영,Yang, Chul-Hak,Lee, Hee-Yong 대한생식의학회 1983 Clinical and Experimental Reproductive Medicine Vol.10 No.2

황소의 정액에서 베타 굴룩유로니다아제를 부분적으로 정제하였다. 이 정제과정에는 $(NH_4)_2SO_4$ 의 분획분리법, 두개의 연속적인 DEAE-셀루로오즈 콜럼 및 등전초점화법(pH4-6) 및 세파덱스 G-200의 절여과 방법이 쓰여졌다. 등전초점화(lsoelectric focusing)법을 사용했을때 pH5.13에서 베타 굴룩유로니다아제는 한 형태의 단백질로 존재하였다. 고도로 정제된 베타 굴룩유로니다아제는 전기영동법에 의해 한개의 주된 띠와 약간의 불순물의 띠로 나타났고 특수활동도는 34Units/mg 단백질로 나타났다. 이 효소는 pH 5.2 와 $48^{\circ}C$ 에서 가장 높은 활동도를 나타냈다. 알부민이나 0.15M 소금용액에서 베타 굴룩유로니다아제는 활동도가 상승됐다. 페놀프타레인-모노-베타-굴룩 유로닉산을 기질로 사용했을때 km값은 2.9mM 이었고 Vmax값은 $0.8{\mu}$mole/min 이었다. 대두의 콘카나발린 A에 흡착하는 것으로 보아 이 효소는 당단백질임이 확인됐다. 토끼, 사람의 정자 아크롬좀 추출물 및 정액에서 이 효소는 높은 활성도를 나타냈다. ${\beta}$-Glucuronidase from bull seminal plasma was partially purified by $(NH_4)_2SO_4$fractionation, two successive DEAE-cellulose columns, isoelectric focusing (pH 4 to 6) and Gel filtration on Sephadex G-200. Only one form of ${\beta}$-glucuronidase was obtained by isoelectric focusing at pH 5.13. Highly purified ${\beta}$-glucuronidase had specific activity of 34 units/mg protein and showed one major and some minor contaminants by disc gelk electrophoresis. The enzyme showed maximum activity at pH 5.2 and at $48^{\circ}C$. The enzyme was completely inhibited by 1,4 saccharo-${\alpha}$-lactone (5 mM). Albumin and 0.15 M NaCl increased the ${\beta}$-glucuronidase activity. Km of ${\beta}$-glucuronidase using phenolphthalein mono-${\beta}$-glucuronic acid as substrate was 2.9 mM and Vmax was $0.8{\mu}$mole/min. The enzyme appeared to be a glycoprotein by its binding to concanvalin·A. Rabbit and human sperm-acrosomal extracts and seminal plasma showed high ${\beta}$-glucuronidase activity.

Biochemistry of Protein Prenylation : farnesyl protein transferase and characterization

양철학 암연구센터 1994 암연구의최신지견 Vol.1994 No.-

하이얄유로니데이스 및 아릴쎌파테이스의 토끼 정자 아크로좀으로부터 정액으로의 배출

양철학,Yang, Chul-Hak 대한생식의학회 1981 Clinical and Experimental Reproductive Medicine Vol.8 No.2

정자의 아크로좀에 존재한다고 알려진 효소들중 실온에 방치할 경우 또는 완충용액으로 정자를 세척할 경우 쉽게 아크로좀 막으로부터 흘러나옴을 관찰하였다. 신선하게 사용된 토끼의 정액을 $0^{\circ}C$에서 트리스 완충용액에 방치할 경우 하이얄유로니데이스는 39%정도가 유출되어 나오고, 또 $37^{\circ}C$에서 1시간 더 둘 경우 나머지 30%, 그리고 두시간째에 17%가 방출되며, 계면활성제로 아크롬을 처리할 경우 단 4%의 효소가 추출되었다. 다른 두 탄수화물 분해요소인 베타 엔 애시틸글루코사미니데이스 및 베타 그룩유로니데이스도 하이얄유로니데이스처럼 쉽게 분리되어 나오고 계면활성제로 추출될 수 있는 양은 대단히 적었다. 이와같이 효소가 아크로좀에서 방출되는 정도에 따라 아크로좀막에 흡착된 정도를 알 수 있으며 동시에 수정과정에서 역활을 이해하는데 도움이 될 것이다.