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        억새 성숙종자로부터 캘러스 유도 및 식물체 재분화에 있어서 식물생장호르몬의 영향

        박충훈(Choong-Hoon Park),김용구(Yong-Goo Kim),김경희(Kyung-Hee Kim),알람이프테칼(Iftekhar Alam),이효진(Hyo-Jin Lee),샤르민샤미마(Shamima Akhtar Sharmin),이기원(Ki-Won Lee),이병현(Byung-Hyun Lee) 韓國草地學會 2009 한국초지조사료학회지 Vol.29 No.4

        억새의 최적 조직배양조건을 확립하기 위하여 성숙종자로부터 배발생 캘러스 유도 및 캘러스로부터 식물체 재분화에 미치는 식물생장 조절물질의 영향을 조사하였다. 배발생 캘러스 유도시 첨가되는 auxin으로는 2,4-D가 가장 효율적이었으며, 3 ㎎/L 2,4-D가 첨가된 배지에서 배발생 캘러스가 가장 높은 빈도로 유도되었다. 식물체 재분화는 배발생 캘러스를 1 ㎎/L 2,4-D와 2 ㎎/L BA가 첨가된 재분화 배지에서 배양했을 때 가장 높은 재분화효율을 보여주었다. 본 연구를 통하여 확립된 효율적인 배발생 캘러스의 유도 및 식물체 재분화 체계는 억새의 신품종 개발을 위한 분자육종 기술 확립에 유용하게 이용 될 수 있을 것이다. In order to optimize tissue culture conditions for genetic transformation of Miscanthus sinensis, we investigated the effects of different plant growth regulators on callus induction and plant regeneration using mature seeds as explant. Dehusked mature seeds were cultured on MS medium supplemented with 3 to 10 ㎎/L 2,4-D, dicamba or NAA, 30 g/L sucrose and 750 ㎎/L MgCl₂ 6H₂O. A number of combinations of auxin and cytokinin (BA, kinetin) were also used. MS medium containing 3 ㎎/L 2,4-D was found optimal for embryogenic callus induction (75.7%) from mature seed. The highest number of plants were regenerated (44.6%) upon transferring the embryogenic callus to MS medium supplemented with 1 ㎎/L 2,4-D plus 2 ㎎/L BA. This high efficient plant regeneration system could be useful to use for molecular breeding of new cultivars by genetic transformation.

      • KCI등재

        포장생육 잔디 포복경을 이용한 잔디 형질전환에 있어서 살균방법의 영향

        안나영,알람 이프테칼,김용구,배은지,이광수,이병현,Ahn, Na-Young,Alam, Iftekhar,Kim, Yong-Goo,Bae, Eun-Ji,Lee, Kwang-Soo,Lee, Byung-Hyun 한국초지조사료학회 2013 한국초지조사료학회지 Vol.33 No.2

        포장에서 생육된 잔디 포복경을 이용한 Agrobacterium 형질전환에 있어서 큰 제한인자였던 곰팡이 오염을 제거할 목적으로 포복경 조직에 대한 새로운 살균법을 개발하고자 하였다. 여러 가지 살균방법 중에서 30% NaOCl로 15분간 처리한 다음 0.1% $HgCl_2$로 25분간 처리 했을 때 포복경 절편체의 생존율이 높았으며, 0.1% $HgCl_2$로 처리시 800 mbar의 진공처리를 5분간 실시했을 때 가장 효과적이었다. 또한 Agrobacterium과 공동배양 시 2.5 mg/l의 amphotericin B를 첨가해 준 배지에서 배양했을 때 가장 높은 생존율을 나타내었다. AmB의 처리는 Agrobacterium의 생장에 영향을 미치지 않았다. 또한 살균된 포복경으로 부터 신초의 재분화에도 영향을 미치지 않았으며 곰팡이 오염만을 효율적으로 억제하는 것으로 나타났다. 이러한 결과는 포장에서 대량으로 생육시킨 잔디 포복경을 이용한 Agrobacterium 형질전환 시 그 효율을 증가시키는데 큰 기여를 할 것으로 추측된다. Zoysiagrass (Zoysia japonica Steud.) is an important forage and turfgrass that spreads by stolons and rhizomes. Zoysiagrass stolon can be used directly for Agrobacterium-mediated genetic transformation by exploiting the potential of direct shoot formation. However, surface sterilization of field-grown stolons is difficult and remains to be explored. We developed an effective surface sterilization and culture method using the stolon explant for infection with Agrobacterium tumefaciens. Among various treatments, sequential disinfection in 30% bleach for 15 min followed by 0.1% mercuric chloride for 25 min resulted in the highest number of clean stolons. The efficacy of mercuric chloride was increased under vacuum conditions by incubating at 800 mbar for 5 min. The inclusion of 2.5 mg/l amphotericin B further prevents fungal growth in in vitro cultures. This protocol would speed up the development of transgenic plants by utilizing field-grown stolon nodes.

      • KCI등재

        식물생장조절물질이 레드 톱 밴트그래스(Agrostis alba L.)의 종자로부터 캘러스 유도와 식물체 재분화에 미치는 영향

        박충훈(Choong-Hoon Park),김경희(Kyung-Hee Kim),이동기(Dong-Gi Lee),알람 이프테칼(Iftekhar Alam),이기원(Ki-Won Lee),이상훈(Sang-Hoon Lee),김기용(Ki-Yong Kim),원성혜(Sung-Hye Won),이병현(Byung-Hyun Lee) 한국초지조사료학회 2008 한국초지조사료학회지 Vol.28 No.4

        레드 톱 밴트그래스의 성숙종자로부터 최적조직배양조건을 확립하기 위하여 종자로부터 배발생 캘러스 유도 및 식물체 재분화 체계를 확립하였다. 종자로부터 배발생 캘러스 유도시 첨가되는 auxin으로는 2,4-D가 가장 효율적이었으며, 2 ㎎/ℓ의 2,4-D가 첨가된 MS 배지에서 가장 높은 빈도로 배발생 캘러스가 유도되었다. 배발생 캘러스로부터 식물체 재분화는 0.5 ㎎/ℓ의 2,4-D와 2 ㎎/ℓ의 BA가 첨가된 N6 배지에서 배양했을 때 64.4%의 높은 재분화율을 나타내었다. 본 연구를 통하여 확립된 성숙종자로부터의 고효율 재분화 시스템은 유전자 형질전환기술을 이용한 신품종 분자육종기술개발에 유용하게 이용 될 수 있을 것이다. In order to develop a simple and reproducible protocol for red top bentgrass(Agrostis alba L.), effect of different growth regulators was investigated for embryogenic calli induction and subsequent plant regeneration using mature seeds. MS medium containing 2 ㎎/ℓ 2,4-D was optimal for embryogenic callus induction from mature seeds. The highest plant regeneration frequency (64.4%) was showed when the embryogenic callus tissues were cultured on N6 medium supplemented with 0.5 ㎎/ℓ 2,4-D and 2 ㎎/ℓ BA. Regenerated plantlets were grown normally when shoots transplanted to the soil. A high-frequency and efficient regeneration system from mature seeds would be helpful for molecular breeding of new variety of red top bentgrass through Agrobacterium-mediated genetic transformation.

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