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Internal Control을 이용한 애멸구에서 벼 줄무늬잎마름병의 검출을 위한 RT-PCR 진단
노태환 ( Tae Hwan Noh ),강미형 ( Mi Hyung Kang ),김정수 ( Jeong Soo Kim ),심형권 ( Hyeong Kweon Shim ),백채훈 ( Chae Hoon Paik ),최만영 ( Man Yeoung Choi ),김형무 ( Hyung Moo Kim ),이건휘 ( Geon Hwi Lee ) 전북대학교 농업과학기술연구소 2012 농업생명과학연구 Vol.43 No.2
애멸구가 매개하는 RSV의 정확한 검출을 위하여 RSV의 RNA3 segment와 애멸구의 18S와 5.8S사이의 ITS region 염기서열을 이용하여 제작된 Duplex 프라이머를 이용하여 RSV를 검출방법을 확립하였다. RSV 검출용 RSV3 F1과 R1 프라이머는 보독충과 이병된 벼에서만 549bp에서 증폭되었고 애멸구 RNA만을 증폭할 수 있는 SBPHF2와 SBPHR 프라이머는 201bp 크기에서 애멸구만 증폭되어 특이적이었다. RSV3 F1, R1과 SBPHF2, SBPHR 프라이머는 동시에 상호 반응하지 않아 Duplex 프라이머로 특이성이 있었고 각각의 애멸구와 벼에서 추출한 Total RAN 200-3ng까지 증폭되었다. Rice stripe virus (RSV) is a serious disease of rice, in Korea and other Asia countries. RSV is transmitted only by the small brown planthopper (SBPH), Laodelphax striatellus in a propagative manner. Therefore a detection of RSV in the SBPH is a need for disease forecasting. A one step duplex RT-PCR was developed to amplify 549 bp of RSV RNA3 and 201 bp fragment of SBPH ITS region as internal control. Especially, The primer pairs from SBPH ITS region were used as specific positive control for each stage of the experiment to ensure the validity of the negative for the detection of RSV in SBPH. This duplex primer kits were able to detect 0.2 ng of total RNA from SBPH and rice. Based on this protocols, each PCR based methods for RSV virulifeorus rate in SBPH were represented more accurate results.