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발효에 의한 라이신(L-lysine) 생산에 관한 연구(1) -라이신 생산균주의 분리 및 라이신 생산조건의 검토-
민태익,권태완,Mheen, Tae-Ick,Kwon, Tai-Wan 한국식품과학회 1971 한국식품과학회지 Vol.3 No.1
전국 각지에서 수집한 토양을 비롯한 기타 시료로부터 배양액중에 lysine을 생산 축적하는 미생물 94주를 분리하여 이를 다시 비교 검토함으로써 lysine생산이 2 mg/ml 이상인 균주 6주를 선정하고 균학적 성질을 조사한 결과 Micrococcus 속 1주, Corynebacterium 속 3주, Brevibacterium 속 2주였다. Corynebacterium sp. 1주 (S-27-12)에 대한 합성 배지에서의 lysine 축적조건을 검토한 결과 glucose 7.5%, urea 0.6%, $KH_2PO_4\;0.2%$, $Na_2HPO_4\;0.05%$, $MgSO_4{\cdot}7H_2O\;0.03%$, $MnSO_4{\cdot}4H_2O\;0.001%$, $FeSO_4{\cdot}7H_2O\;0.0005%$, pH 7.2가 최적이었으며 이 때의 lysine 생산량은 4mg/ml 정도였다. Ninty four strains of lysine producing micro-organisms in culture broth during fermentation have been isolated from soil and other sources. From the comparison of the amounts of lysine produced, 6 strains have been selected as the potentially useful strains, and identified tentatively as Micrococcus sp. (S-16-4), Corynebactcrium sp. (S-27-12, S-281-3, CBY-4) and Brevibacterium sp. (M-6-71, F-629-2), respectively. From the further studies with Corynebacterium sp., S-27-12, its maximum yield was found to be 4mg lysine/ml of synthetic medium, consist of glucose(7.5%), urea(0.6%), $KH_2PO_4(0.2%)$, $Na_2HPO_4(0.05%)$, $MgSO_4{\cdot}7H_2O(0.03%)$, $MnSO_4{\cdot}4H_2O(0.001%)$ and $FeSO_4{\cdot}7H_2O(0.0005%)$ at pH 7.2 and $30^{\circ}C$ after 4 days.
한문희,성백린,김봉희,민태익,Han, Moon-H.,Seong, Baik-Lin,Kim, Bong-Hee,Mheen, Tae-Ick 생화학분자생물학회 1981 한국생화학회지 Vol.14 No.3
E. coli에서 추출한 penicillin amidase를 황산암모니움에 의한 분별침전 및 DEAE-cellulose, CM-cellulose, Sephadex G-100 컬럼 크로마토그라피에 의해서 3,200배 정제하였고, 이때의 효소의 회수율은 57%이었다. 이것은 기존방법에 비해 비활성은 56배, 그리고 회수율은 1.4배 증가되었다. 이와 같이 얻은 penicillin amidase는polyacrylamide gel 전기영동에 의해 순수함이 증명되었고, SDS-gel 전기영동에 의해 분자량은 55,000임을 알았다. 정제된 효소외 비활성은 기질인 벤질페니실린에 대하여 2.22 ${\mu}$kat/mg protein 이었고 촉매속도항수는 122 $sec^{-1}$이었다. 이 효소의 최적온도 및 pH는 각각 $50^{\circ}C$와 8.5이었으며, $50^{\circ}C$ 이상의 온도와 pH 9.0 이상에서 효소불활성이 빨랐다. $Hg^{++}$를 제외한 대부분의 금속이온은 효소활성에 영향이 없었다. 벤질페니실린에 대한 $K_m$ 상수는 2.9 mM, 기질 저해상수는 35.4 mM, 리고 반응생성물인 6-aminopenicillanic acid (6-APA)와 페닐초산에 의한 저해상수는 각각 10 mM과 4.1 mM이었다. 아실중간체를 형성하는 4단계 반응을 가정하여 steady state 방정식을 유도하고 반응생성물의 효소에 대한 저해양상에 대해서 실험결과 및 보고된 결과들과 비교하였다. Penicillin amidase of Escherichia coli was purified abot 3,200 folds by ammounim sulfate fractionation, DEAE-cellulose, CM-cellulose, and Sephadex G-100 colum chromatography. The overall recovery yield was 57%. As compared with the previous purification method, the purification factor and the recovery yield increased about 56 and 1.4 folds, respectively. The purified enzyme was found to be homogeneous in polyacrplamide gel electrophoresis. The molecular weight determined by SDS-gel electrophoresis was 55,000. The specific activity of penicillin amidase for benzylpenicillin was 2.22 ${\mu}$moles/sec/mg protein and the catalytic rate constant was 122 $sec^{-1}$. The optimum pH and temperature were 8.5 and $50^{\circ}C$, respectively. This enzyme was rapidly deactivated at temperature above $50^{\circ}C$ and pH above 9.0. Almost all of the metal ions did not affect the enzyme activity except for $Hg^{+2}$ ion. The Michaelis constant for benzylpenicillin was 2.9 mM, the substrate inhibition constants for 6-APA and phenylacetic acid were 10 mM and 4.1 mM, respectively A steady state equation based on the four-step ordered reaction with an acyl intermediate was derived. The inhibition modes of both products based on this equation were discussed with respect to the present experimental results.
대두품종(大豆品種)과 선발(選拔) Rhizobium japonicum간의 숙주(宿主) 친화성(親和性)
김창진,이윤,김성훈,유익동,민태익,Kim, Chang-Jin,Rhee, Yoon,Kim, Sung-Hoon,Yoo, Ick-Dong,Mheen, Tae-Ick 한국토양비료학회 1986 한국토양비료학회지 Vol.19 No.4
우수(優秀) 대두접종제(大豆接種劑)로 이용할 균주(菌株)의 선발을 목적으로 국내(國內)에서 선발한 R. japonicum 균주(菌株)들과 현재 대두장려품종으로 보급되고 있는 대두품종들과의 상호(相互) 접종실험(接種實驗)을 통하여 숙주친화성(宿主親和性) 정도를 조사하였다. 얻어진 결과는 다음과 같다. 1. 공시(供試) 근류균주별(根瘤菌株別) 대두품종(大豆品種)과의 친화성(親和性) 정도를 보면 R. japonicum R-214, R-138 균주(菌株)가 근류형성능(根瘤形成能), 질소고정활성(窒素固定活性) 및 총(總) 질소흡수량(窒素吸收量)도 높아 대두품종(大豆品種)과 친화성(親和性) 범위가 비교적 넓었으며 R. japoncum R-224 균주(菌株)는 아주 낮은 것으로 판단되었다. 2. 대두품종별(大豆品種別) 근류균(根瘤菌)과의 친화성(親和性)은 황금(黃金)콩, 장백(長白)콩 등이 높았으며 그 다음이 장엽(長葉)콩, 단엽(短葉)콩, 백운(白雲)콩, 동북태(東北太) 등의 순이었고 방사(放射)콩이 제일 낮았다. 3. 일반적으로 질소고정활성(窒素固定活性)이 우수(優秀)한 균주(菌株)가 열등한 균주(菌株)보다 숙주친화성(宿主親和性) 범위가 넓은 것으로 판단되었다. In order to select suitable strains for utilization as soybean inoculants, the affinity between Rhizobium japonicum strains isolated from the domestic field and the several soybean varieties being distributed as recommended species was investigated by cross-inoculation experiments. The results obtained are as follows: 1. Rhizobium japonicum R-214 and R-138 showed broad affinity range to varies soybean species in terms of the nodule forming ability, the nitrogen fixing activity and the amount of total nitrogen absorption. In contrast, Rhizobium japonicum R-224 showed very low affinity to the same soybean groups. 2. The affinity of Hwang-Keum Kong and Jang-Paeck Kong to the rhizobium strains was the most signigicant, and that of Jang-Yeop Kong, Dong-Buk Tae, Paeck-Woon Kong and Dan-Yeop Kong was also significant. On the other hand, Pang-Sa Kong showed low affinity to the strains. 3. In general, the strains having high nitrogen-fixing activity seemed to possess the broad affinity range to the soybean hosts.