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Choi, Cheol-Hee,Kim, Hyang-Suk,Lee, Tae-Bum,Sue, Youn-Koung,Rha, Han-Sik,Jeong, Jae-Hwan,Lee, Hong-Young,Do, Nam-Yong,Park, You-Hwan,Min, Young-Don 조선대학교 부설 의학연구소 2000 The Medical Journal of Chosun University Vol.25 No.1
목적: 항암제에 대한 다약물내성의 출현이 임상 화학요법시 실패의 주된 원인중의 하나로 생각되고 있다. 최근 많은 내성 암세포에서 다약물내성관련단백(multidrug resistance-associated protein, MRP)이 다약물내성 기전으로 보고되고 있어, 이 단백의 유전자 발현의 분석이 절실히 요구되고 있다. 그러나 현재까지 보고된 MRP mRNA를 측정하기 위한 역전사-중합효소 연쇄반응(reverse transcription-PCR, RT-PCR)은 여러가지 문제점을 가지고 있다. 그러므로 본 연구에서는 RT-PCR방법을 이용하여 MRP mRNA를 보다 편리하고 정확하게 정량할 수 있는 방법을 확립하고자 하였다. 재료 및 방법: MRP를 과발현하는 세포주인 HeLaJ2c내성세포와 이 세포의 야생형(wild type)인 HeLaS3세포를 모델세포로 이용하여 RT-PCR방법의 조건을 최적화하였다. 정량성을 높히기위하여 b-actin mRNA를 내인성 대조물질로 사용하였다. MRP와 b-actin mRNAs의 세포내 함량의 큰 차이를 극복하기 위해서 각각의 PCR 증폭 kinetics를 측정하여 증폭이 plateau에 도달하기전의 PCR cycle 수를 선택하였다. 감도와 정량성을 높이기 위해서 동위원소를 사용하였을 뿐 아니라 신속하고 간편하게 정량할 수 있도록 MRP와 b-actin의 PCR조건은 같으면서 PCR산물의 크기는 서로 다르도록 primer쌍을 고안하였다. 이 RT-PCR방법을 이용하여 여러 암세포주와 백혈병환자의 시료에서 MRP mRNA의 상대적 양을 측정하였다. 결과: 본 연구에서 RT-PCR방법에 의한 MRP mRNA측정결과 Northern blot분석결과와 유사하였으며 재현성과 감도가 우수하였다. 이 같은 RT-PCR 방법으로 다양한 암세포주 및 백혈병환자의 암시료에서 다양한 정도로 발현되는 MRP mRNA를 간편하게 정량할 수 있었다. 결론: 본 연구에서 개선된 RT-PCR방법은 정량성이 높고, 편리하며, 감도가 뛰어나고, 재현성이 높아 임상시료를 포함한 암세포에서 MRP mRNA를 정량하는데 유용하게 이용될 수 있을 것으로 생각된다.