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Western Blot을 이용한 대장암과 대장선종의 Calreticulin 단백 발현 연구
금보라 ( Bora Keum ),진윤태 ( Yoon Tae Jeen ),박상훈 ( Sanghoon Park ),서연석 ( Yeon Seok Seo ),김용식 ( Yong Sik Kim ),전훈재 ( Hoon Jai Chun ),이홍식 ( Hong Sik Lee ),엄순호 ( Soon Ho Um ),이상우 ( Sang Woo Lee ),최재현 ( Jai Hy 대한장연구학회 2006 Intestinal Research Vol.4 No.1
목적: 대장암 발생에 여러 유전자 변이가 관여하여 이에 대한 표지자의 검색을 위해 유전자의 최종 발현산물인 단백질을 연구하여 유전자의 기능을 규명하고 암의 조기 진단 및 치료의 표지자를 찾는 연구가 진행되고 있다. Calreticulin은 대장암에서 정상 대장 점막에 비해 특이하게 발현하는 것으로 밝혀졌다. 본 연구에서는 calreticulin을 이용하여 정상조직과 대장선종 및 대장암에서의 발현을 비교 분석하고자 하였다. 대상 및 방법: 2004년 12월부터 2005년 3월까지 대장암 및 동시성 대장선종 각 예에서 선종, 대장암과 정상점막의 조직을 채취하였다. 채취한 조직에서 단백질을 분리하여 western blot을 시행하였고 항 calreticulin 항체를 사용하여 표지한 후 화학 발광 염색방법에 의해 확인하였다. 각 예에서 정상 대장 점막의 발현정도를 ‘1’로 하여 선종과 대장암의 발현을 비교하였다. 결과: Calreticulin의 발현 정도는 정상 대장 점막에 비해 대장선종이 평균 1.69±0.37, 대장암이 평균 2.78±1.12였다. 각 군 간의 차이를 비교하였을 때 정상점막과 대장암, 정상점막과 선종 간에는 유의한 차이를 보였다. 대장선종보다 대장암에서 calreticulin이 많이 발현되었으나 통계적으로 유의하지는 않았다. 결론: 대장암뿐만 아니라 전구 병변인 선종에서도 calreticulin이 정상조직에 비해 높게 발현되어 대장암 및 대장 선종을 예측하는 선별 검사 표지자 연구에서 calreticulin의 역할을 기대할 수 있을 것으로 생각한다. 향후 많은 환자를 대상으로 대장암 발생과 calreticulin의 연관성 및 검사 실용 가능성에 대한 연구가 필요할 것으로 생각된다. Background/Aims: Colon cancer has a multistep process of molecular changes on the way of carcinogenesis. The detection of gene mutations associated with those molecular changes is expected to be able to predict or diagnose colon cancer. Calreticulin is one of the protein which has being investigated as a biomarker of colorectal cancer. The Aims of this study was to demonstrate the expression of calreticulin in normal colon mucosa, colonic tubular adenoma and colorectal cancer of each patient, and analyze the differences among them. Methods: 8 patients who have colorectal adenocarcinoma and more than 10 mm sized tubular adenoma synchronously were enrolled. Colorectal adenocarcinoma, tubular adenoma and normal colon tissue were taken from each patient. After proteins isolation and separation, western blot assay were performed to demonstrate calreticulin. The results were analyzed by Wilcoxon Signed Rank Test. Results: Calreticulin was more expressed in colorectal adenocarcinoma and tubular adenoma significantly compared with normal mucosa. Also, calreticulin was more expressed in adenocarcinoma than in adenoma but there were no significant diffences. Conclusions: These results suggest that calreticulin may be available for an early diagnostic biomarker for colorectal cancer or advanced colon adenoma. (Intestinal Research 2006;4:7-11)
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