식품에서 분리한 Bacillus cereus의 특성 및 식품안전관리방안 연구 = Characterization of Bacillus cereus isolated from foods and Food safety control

목차 (Table of Contents)

• 제1장 서 론 1
• 1-1. Bacillus cereus의 일반적인 특성 1
• 1-2. Bacillus cereus의 병원성 및 식중독 발생 현황 4
• 1-2-1. 설사형 독소 (enterotoxin) 및 구토형 독소 (emetic toxin) 4
• 1-2-2. 기타 병원성 인자 8
• 1-2-3. 식중독 발생 현황 8
• 1-2-4. 식중독 치료 및 예방 12
• 1-3. Pulsed Field Gel Electrophoresis (PFGE) 13
• 1-4. Bacillus cereus의 성장예측모델 15
• 1-5. 연구목적 17
• 제2장 재료 및 방법 20
• 2-1. Bacillus cereus의 분리․동정 20
• 2-1-1. 사용균주 20
• 2-1-2. Bacillus cereus의 분리 22
• 2-1-3. 분리균주의 동정 및 생화학적 특성 22
• 2-2. 항생제 감수성 시험 22
• 2-3. Bacillus cereus의 독소 생성능 검토 26
• 2-3-1. PCR을 이용한 독소유전자 검출 26
• 2-3-1-1. PCR을 이용한 enterotoxin 유전자 검출 시험 26
• 2-3-1-2. PCR을 이용한 emetic toxin 유전자 검출 시험 28
• 2-3-2. 면역학적 방법에 의한 enterotoxin 검출시험 28
• 2-3-2-1. RPLA를 이용한 Hbl 독소 확인 28
• 2-3-2-2. Immunoassay (BDE-VIA)를 이용한 Nhe 독소 확인 29
• 2-3-3. Emetic toxin을 생성하는 균주의 검출 시험 30
• 2-3-4. LC/MS/MS에 의한 emetic toxin 검출시험 31
• 2-3-4-1. 표준용액의 제조 및 회수율시험 31
• 2-3-4-2. 시료의 전처리 32
• 2-3-4-3. 시험용액의 조제 및 분석 33
• 2-3-4-4. 분석 조건의 검증 35
• 2-3-4-4-1. 검량선 (calibration curve) 및 직선성 (linearity) 35
• 2-3-4-4-2. 검출한계 (LOD) 및 정량한계 (LOQ) 35
• 2-3-4-4-3. 정확성 (accuracy) 35
• 2-3-4-4-4. 정밀성 (precision) 36
• 2-4. Bacillus cereus의 PFGE 36
• 2-4-1. Plug 제조 36
• 2-4-2. 제한효소 처리 37
• 2-4-3. PFGE 실시 37
• 2-5. Bacillus cereus 성장 모델 (growth model) 구축 38
• 2-5-1. Bacillus cereus의 온도에 따른 생육도 및 독소생성능 비교 38
• 2-5-2. 김밥 및 두부 중 Bacillus cereus 성장 예측모델 구축 및 검증 38
• 2-5-3. 김밥 및 두부에서의 배양시기 및 온도에 따른 독소생성능 비교 41
• 제3장 결과 및 고찰 42
• 3-1. Bacillus cereus의 분리 및 특성 42
• 3-2. Bacillus cereus의 항생제 감수성 시험 45
• 3-3. Bacillus cereus의 독소 생성능 비교 49
• 3-3-1. PCR을 이용한 독소 유전자 검출 49
• 3-3-1-1. PCR을 이용한 enterotoxin 유전자 검출 49
• 3-3-1-2. PCR을 이용한 emetic toxin 유전자 검출 56
• 3-3-2. 면역학적 방법에 의한 enterotoxin 검출 59
• 3-3-3. LC/MS/MS에 의한 emetic toxin (cereulide) 검출 61
• 3-3-3-1. Cereulide와 valinomycin의 MRM 분석조건 확립 61
• 3-3-3-2. 분석조건의 검증 64
• 3-3-3-2-1. 특이성 (specificity) 64
• 3-3-3-2-2. 검량선 (calibration curve) 및 직선성 (linearity) 64
• 3-3-3-2-3. 검출한계 (LOD) 및 정량한계 (LOQ) 66
• 3-3-3-2-4. 정밀성 (precision) 66
• 3-3-3-2-5. 정확성 (accuracy) 67
• 3-3-3-2-6. 회수율 (recovery) 67
• 3-3-3-3. 시료분석결과 67
• 3-4. Bacillus cereus의 PFGE 70
• 3-4-1. Bacillus cereus의 분자유전학적 분류 70
• 3-4-2. 독소형별에 따른 PFGE pattern 비교 79
• 3-5. Bacillus cereus 성장 모델 (growth model) 구축 81
• 3-5-1. 온도별 Bacillus cereus 증식 패턴 및 독소생성능 81
• 3-5-1-1. 온도별 Bacillus cereus 증식 패턴 81
• 3-5-1-2. 생육시기 및 온도에 따른 Hbl 독소의 생성능 85
• 3-5-1-3. 생육시기 및 온도에 따른 Nhe 독소의 생성능 87
• 3-5-1-4. 생육시기 및 온도에 따른 emetic toxin (cereulide) 생성능 88
• 3-5-2. 배지에서의 Gompertz function을 이용한 증식곡선 fitting 90
• 3-5-3. 배지에서의 Bacillus cereus 성장예측모델 개발 및 검증 94
• 3-5-4. 김밥 및 두부 중 Bacillus cereus 증식패턴 및 독소생성능 103
• 3-5-4-1. 온도별 Bacillus cereus 증식패턴 103
• 3-5-4-2. 생육시기 및 온도에 따른 Hbl 독소의 생성능 105
• 3-5-4-3. 생육시기 및 온도에 따른 Nhe 독소의 생성능 108
• 3-5-4-4. 생육시기 및 온도에 따른 cereulide의 생성능 109
• 3-5-5. 김밥 및 두부에서의 Gompertz function을 이용한 증식곡선 fitting 113
• 3-5-6. 김밥 및 두부 중 Bacillus cereus 성장예측모델 개발 및 검증 116
• 제4장 요 약 123
• 참고문헌 126
• 영문요약 142
• 감사의 글 145