Chromium methionine chelate가 3T3-L1 지방전구세포의 증식, 분화와 transcription factor발현에 미치는 영향 = Effect of Chromium Methionine Chelate on Adipocyte Proliferation, Differentiation and Extression of Transcription Factor in 3T3-L1 Preadipocyte

국문 초록 (Abstract)

Cr은 glucose tolerance factor로서 당대사뿐만 아니라 결과적으로 혈중지방대사물질의 변화와 체지방의 변화와 같은 지방대사에 영향하는 것으로 보고되고 있다. 하지만 Cr이 어떻게 지방 대사에 영향 하는지에 대하여서는 알려진 바가 없다. 따라서 본 연구에서는 우선 세포수준에서 지방세포의 증식과 분화에 미치는 영향을 알아보기 위하여 Cr이 3T3-L1 지방전구세포의 분화에 미치는 영향을 규명하고자 하였다. 3T3-L1 지방전구세포는 생쥐(mouse)의 배아(embryo)로부터 분리한 세포로, 이들이 지방세포로 분화하기 때문에 지방세포분화를 연구하는데 널리 사용되어 왔다.
본 연구에서는 3T3-L1 지방전구세포를 Dulbecco's modified Eagle's medium(DMEM) 배양액에 10% bovine serum(BCS)를 섞어서 배양용기에 꽉 찬 상태까지 배양했고, 세포 seeding 6일 후에 호르몬(insulin, dexamethasone, isobutyl - methylzanthine) 을 처리해서 세포분화를 유도했다. 그 후 3T3-L1 지방전구세포의 분화는 glycerol-3-phosphate dehydrogenase 활성도에 의해 측정했고, Oil red O 염색으로 세포 내 지질방울의 형태변화를 관찰하였고 지방전구세포의 증식은 MTT 방법을 통해 세포 수를 측정하였다. 아울러 지방세포로 분화시 분화를 조절하는 대표적인 전사인자인 PPARγ, C/EBPα와 지방특이지표유전자인 FAS, LPL, aP2의 mRNA 발현량을 측정하였다. 본 연구에 사용한 Cr은 50ppb Cr-Met와 Cr-Pic를 사용하였으며 세포를 seeding하고 이틀 뒤부터 첨가하였다.
본 연구 결과, Cr 첨가는 3T3-L1 지방전구세포에 대한 지방세포의 증식과 분화에는 차이가 나타내지 않았다. 또한 전사인자와 지방특이유전자의 mRNA 발현량도 Cr 무첨가 대조구와 유의적인 차이가 없었다. 따라서 본 연구는 Cr의 지방대사 조절은 지방세포의 증식과 분화와는 연관성이 높지 않음을 증명하였다. 따라서 Cr에 의한 지방대사 조절의 기전은 오히려 지방의 축적량 조절과 관련되어 있다고 판단된다.

다국어 초록 (Multilingual Abstract)

Chromium has emerged as an essential trace mineral in nutrition. Chromium has a role in carbohydrate and lipid metabolism. A number of studies have evaluated the effect of Cr on glucose tolerance and insulin regulation that associated with lipid metabolism. However, the exact mechanism of lipid metabolism is not known yet. This in vitro study investigated the effect of chromium on the proliferation, differentiation and expression of transcription factor in 3T3-L1 preadipocyte. 3T3-L1 cell is a well-established cell line derived from mice embryo and the differentiate into adipocyte. This cell was plated in Dulbecco's modifed Eagle's medium(DMEM) plus 10% bovine serum(BCS). After six days, the cell was plated, and induced to differentiate by hormone treatment (day0) [insulin, dexamethasone and isobutyl-methylzanthine]. Differentiation of the 3T3-L1 cells were determined by glycerol-3-phosphate dehydrogenase (GPDH) activity and was monitored morphologically with Oil red O staining. Proliferation of the 3T3-L1 cell was determined by MTT assay. And, expression of transcription factor(PPARγ, C/EBPα) and fat specific marker gene(FAS, LPL, aP2) in 3T3-L1 preadipocyte were also measured. There were no (p>0.05) significant differences on proliferaton and differentiation in 3T3-L1 preadipocyte among Cr treatment. There were either no (p>0.05) differences on expression of transcription factor and fat specific marker gene in 3T3-L1 preadipocyte among Cr treatment.
According to the results of this study, it can be concluded there could be no effect of Cr on proliferation, differentiation in 3T3-L1 preadipocyte. Therefor it could be suggested that the action of Cr in lipid metabolism was associated with adiposity than proliferation and differentiation of adipocyte.

목차 (Table of Contents)

• Ⅰ. 서론 = 1
• Ⅱ. 연구사 = 4
• Ⅲ. 재료 및 방법 = 18
• Ⅳ. 결과 및 고찰 = 27
• Ⅴ. 결론 = 46