인체 간염 및 간암특이적인 엔아세칠 글로코사민 전이효소 III 유전자를 이용한 간질환 특이적인 전사조절 영역, 간지환 생성기작 해석 및 억제연구

국문 초록 (Abstract)

1. Human fetal liver cDNA를 주형으로 하여 PCR에 의한 방법으로 GnT-Ⅲ cDNA를 cloning하였다. GnT-Ⅲ cDNA는 1,593 bp의 coding region으로 531개의 아미노산으로 구성되었다.
2. GnT-Ⅲ의 coding region중 stem region 즉 start codon으로부터 69bp의 downstream에 primer를 design하여 truncated form의 GnT-Ⅲ gene을 증폭시켜서 pET-22b(+) vector에 cloning하였다. GnT-Ⅲ는 E.coli BL21(DE3)에서 발현시켜서 약 60,000 Da의 fusion protein을 생산하였다.
3. Inclusion body의 형태로 생산된 GnT-Ⅲ fusion protein은 2％ Triton X-100으로 세척하여 inclusion body만을 정제하였다.
4. Human genomic DNA library를 GnT-Ⅲ cDNA clone을 SacI 1.5Kb 단편을 probe로 사용하여 screening하였다. 분리된 Clone의 insert size는 12.5Kb였으며 EcoRI으로 절단하여 probe에 hybrid된 7.8Kb단편을 subcloning하였다.
5. pHG 7.8의 제한효소 지도를 작성하고 GnT-Ⅲ gene의 5'-flanking region을 분리하여 염기서열을 결정하였다. 1,650 bp의 5'-flanking region sequence에는 TATA-와 CAAT consensus sequence가 없는 등, murine β-1,4 galactosyltransferase와 유사한 특징을 보여주는 한편 11개의 insulin response element(IRE)와 7개의 potential AP-2 binding sites, 2개의 SPI concensus sequence(GC boxes) 등이 확인되었고 또한 2개의 glucorticoid response element(GRE)와 cAMP-responsive element가 있었다.
6. 5'-RACE방법을 이용하여 82bp의 noncoding exon을 확보하였으며 또 다른 promoter의 존재를 확인하였다.
7. GnT-Ⅲ cDNA probe로 Northern hybridization을 행한 결과 조직특이적 발현양상을 나타내었다. GnT-Ⅲ는 heart, kidney, liver,brain 등의 유아조직과 placenta, brain 등의 정상 성인조직, leukemia계열의 cell line에서 주로 발현되었다.
8. GnT-Ⅲ의 promoter영역에 대한 functional analysis를 통하여 간암세포 특이적인 regulatory factor를 분석하여 발현 메카니즘에 대한 해석이 요구된다.
9. 현재는 확보된 noncoding exon을 probe로 이용하여 또 다른 promoter를 확보하고 있는 중이다.
10. Inclusion body의 형태로 생산된 GnT-Ⅲ fusion protein을 시험관에서 활성화시키는데 성공하여 저해제 참색을 위한 효소활성 assay에 응용가능하다.

목차 (Table of Contents)

• 요약문
• Summary
• (1) 서 론
• (2) 실험재료 및 방법
• (3) 결과 및 논의
• (4) 결론
• (5) 참고문헌
• (6) 발표논문 및 초록 첨부
• (8) 연구비 사용내역
• (8) 연구결과 활용방안
• (9) 참고 및 건의사항
• (10) 배출 인력 양성