새로운 혈소판 응집억제인자의 특성과 cDNA 클로닝 및 유전자 발현

국문 초록 (Abstract)

한국산 뱀(A. halys brevicaudus) 독으로부터 혈소판 응집억제 활성을 갖는 물질을 정제하고, 이를 Salmosin이라 명명하였다. 정제된 Salmosin은 Mass spectrum을 이용하여 4,474 Da의 분자량의 단백질로 확인되었다. Solid-phase GPⅡb-Ⅲa binding assay와 ADP에 의해 유도되는 혈소판 응집 반응의 억제도 측정을 통해, Salmosin은 각각에 대해 2.2 nM과 131 nM의 IC_50 값을 나타내었다. 이러한 결과는 합성펩타이드 GRGDS에 비해 100배 또는 1000배의 강력한 혈소판 응집 억제도일뿐만 아니라 기존의 disintegrin류에 비해서도 효율적인 활성을 의미한다. Venom gland cDNA library를 이용한 클로닝을 통해 Salmosin을 coding하는 partial cDNA clone을 획득하였다. 유전자 염기서열에서 유추된 아미노산 서열 분석을 통해, Salmosin은 73개의 아미노산 잔기로 구성된 단일 폴리펩타이드로서 부착성 단백질의 예상되는 결합 부위인 RGD 서열의 존재를 확인하였다. 또한 12개의 cysteine 잔기들의 위치가 보존되어 있고 이들이 분자 내부에서 6개의 disulfide bridge 형성함으로써, 강력한 GPⅡb-Ⅲa antagonist 활성을 위한 특이한 3차구조 형성에 기여할 것으로 예상된다.

다국어 초록 (Multilingual Abstract)

A platelet aggregation inhibitor, Salmosin was purified from Agkistrodon halys brevicaudus snake venom by means of Benzamidine-Sepharose DEAE-Toyopearl. TSK G2000SW HPLC gel filtration, and reverse-phase HPLC We isolated cDNA encoding the Salmosin using the cDNA library of the snake venom gland, determined its nucleotide sequence, and deduced the amino acid sequence This protein is a single-chain polypeptide containing 73 amino acids and 12 cysteines as well as the sequence Arg-Gly-Asp( RGD ), a proposed recognition site of adhesive molecules The primary sequence of the Salmosin shows considerable homology to previously described peptides of snake venom GPⅡb-Ⅲa antagonist family A molecular mass of 7,474 Da was obtained by matrix-assisted laser desorption ionization( MALDI) mass spectrometry The Salmosin inhibited GPⅡb-Ⅲa binding to immobilized fibrinogen with an IC_50 of 22 nM and platelet aggregation induced by ADP with an IC_50 of 131 nM, about 100-fold and 1000-fold more potent respectively than the synthetic peptide GRGDS for the inhibition Furthermore, the IC_50 values of the Salmosin were lower than those of other known disintegrins, kistrin, echistatin, and flavoridin, suggesting that the Salmosin may have a therapeutic potential as an antithrombotic agent.

목차 (Table of Contents)

• 요약
• 1.서론
• 2.실험재료 및 방법
• 3.결과
• 4.논의
• 5.결론
• 6.참고문헌
• 7.발표논문 초록첨부
• 8.연구비 사용내역
• 9.연구결과 활용방안
• 10.참고 및 건의사항