Escherichia coli K-12의 $trpL({\Delta}att)trpE^{FBR}$ 변이주 구성과 그의 특성 = Construction of escherichia coli K-12 $trpL({\Delta}att)trpE^{FBR}$ Mutant and Its Characteristics

국문 초록 (Abstract)

재조합 trp operon plasmid의 trp gene source 개발을 위해 trpE, D gene 산물인 anthranilate synthetase가 feedback inhibition을 받지 않고 또한 leader region내에 있는 attenuator site에서 attenuator control을 받지 않는 $trpL(\Delta{att})trpE^{FBR}$ 변이주를 얻고 그 특성을 조사하였다. 조효소 반응액에 트립토판을 $10^{-3}M$ 첨가하였을 때 anthranilate synthetase의 활성은 야생균주에서는 50% 감소한 반면, 변이주 LC1l3에서는 거의 변화가 없었다. LC113 변이주는 트립토판이 $10^{-3}M$ 존재하는 repression조건하에서 야생균주에 비해서 anthranilate synthetase 활성이 10배 증가하였고 tryptophan synthetase 활성은 20배 증가하였다. Donor 균주인 LC112 ($trpR^-trpE^{FBR}$)나 변이주인 LC113 [$trpR^-trpL({\Delta}att)trpE^{FBR}$ 균주는 모두 $trpR^-$인데, 최소 배지중에 트립토판을 $10^{-3}M$ 첨가한 상태에서 LC112 균주는 anthranilate synthetase 활성이 25% 감소된 반면, 변이 주인 LC113 균주는 anthranilate synthetase 활성이 약간만 감소 하였다. 이는 LC112 균주는 attenuator control을 받고, LC113 균주는 attenuator control을 받지 않음을 시사한다. 그러므로, 새로 구성된 변이주는$trpL({\Delta}att)trpE^{FBR}$의 유전형질을 갖는 변이주이며 재조합 trp operon plasmid의 trp gene source로서 유용하리라 생각된다.

다국어 초록 (Multilingual Abstract)

In order to use as gene source for the cloning of trp operon, the trp operon with attenuator region in the leader sequence deleted and trpE gene mutated to feedback inhibition resistance was constructed and its properties were characterized. When $10^{-3}M$ tryptophan was added to the reaction mixture of anthranilate synthetase assay, activity of enzyme preparation from the $trpL({\Delta}att)trpE^{FBR}$ was unchanged while that of enzyme preparation from wild type strain was reduced approximately 50%. The isolated $trpL({\Delta}att)trpE^{FBR}trpR^-$ (LC113) mutant showed 10-fold increase in anthranilate synthetase activity and 20-fold increase in tryptophan synthetase activity over wild type strain when grown in the presence of $10^{-3}M$ tryptophan. Deletion of attenualor region in the leader sequence was confirmed by the fact that the anthranilate synthetase activity of this mutant decreased much less than the $trpR^-$ parental strain by the addition of $10^{-3}M$ tryptophan in the growth medium.