의약품동등성재평가 대상 성분의 생동성평가방법에 관한 연구 : 유비데카레논 = Development of the Standard Protocol of Bioequivalence Reevaluation : Ubidecarenone

다국어 초록 (Multilingual Abstract)

Validated high-performance liquid chromatographic determination of ubidecarenone (CoQ10) in plasma was developed using electrochemical detection by three institutions, and single-dose bioavailability study of Decaquinon Capsules 5 mg (reference drug: Hanil Pharm. Ind. Co., Ltd.) was conducted sequentially in two different institutions, since no significant absorption was found in the study of 1st institution using Noblamin Capsules. Plasma concentration was calculated by substracting mean intrinsic total CoQ10 concentration of three determinations obtained prior to drug administration from measured plasma total CoQ10 concentration. From the plasma total CoQ10 concentration vs. time curves obtained from 16 healthy volunteers after single-dose (100 mg) administration, the following pharmacokinetic parameters were obtained. The area under the plasma concentration-time curve (AUCt), peak plasma concentration (Cmax), time to reach peak plasma concentration (Tmax), and elimination half-life (t₁/₂β), were found to be 16.29 ± 5.76 ㎍․hr/mL, 0.36 ± 0.14 ㎍/mL, 11.0 ± 17.1 hr, 0.0548 ± 0.152 hr⁻¹ 및 54.1 ± 28.8 hr, respectively. Based on the evaluation of analytical conditions and assay validation obtained from three different institutions, the protocol for the bioequivalence study of ubidecarenone capsules was suggested as follows. Human plasma samples (0.1 mL) spiked with 50 μL of internal standard solution (CoQ9, 2 ㎍/mL in 1-propanol) and 850 μL of 1-propanol was vortex-mixed and centrifuged at 21000 g and at 4 ℃ for 10 min. Forty microliters of supernatant are injected into the RP octadecyl column and eluted with a mixture of sodium acetate trihydrate, glacial acetic acid, isopropanol, methanol and hexane (6.8 g : 15 : 15 : 690 : 280 v/v) at a flow rate of 1.2 mL/min. Electrochemical detector is set at E1 -650 mV and E2 450 mV. Using this assay method, single-dose bioavailability study is conducted to investigate the pharmacokinetic behavior of Decaquinon Capsules in 8 healthy Korean volunteers. Each volunteer receives 20 capsules of 100 mg dose with 350 mL of water. Following oral administration, plasma samples are taken at 0, 1, 2, 4, 6, 8, 10, 12, 24 and 48, 72, 96 and 144 hour, and CoQ10 concentrations in plasma samples are determined by above methods using a calibration curve constructed in the concentration range 40 ～ 4000 ng/mL. Assay results obtained are statistically evaluated according to the bioequivalence guidance of KFDA.

국문 초록 (Abstract)

국내 의약품 제제들의 의약품동등성 재평가 사업을 조속하고 효과적으로 추진하기 위해 성분별로 대조약을 선정하고 이의 생체이용률 시험법을 표준화함으로써 생물학적동등성시험과 의약품동등성재평가 사업을 효율적이고 경제적으로 추진할 수 있는 기반을 조성할 필요성이 있다. 유비데카레논 캡슐의 대조약인 노브라민 캡슐 (10 mg)과 데카키논 캡슐 (5 mg)의 생체이용률을 측정하기 위한 분석법을 3개 기관이 전기화학검출에 의한 액체크로마토그래프법으로 검토하여 검증하고, 각 기관별로 생체이용률시험을 순차로 행하여 유비데카레논 캡슐의 생물학적동등성시험의 표준적인 시험법을 제시하고자 하였다. 각 기관별로 혈중 유비데카레논 분석법을 전기화학 검출에 의한 액체크로마토그래프법으로 확립하였다. 최종 선정한 분석조건으로는 역상 C18 칼럼을 가지고 검토한 결과 유비데카레논과 내부표준물질인 코엔자임 Q9이 양호하게 분리되어 특이성이 있었으며, 50 ∼ 4000 ng/mL의 농도범위에서 상관계수 0.999 이상의 양호한 직선성을 나타내었다. 정량한계농도(50 ng/mL)에서 정밀성이 3개 기관 모두 C.V.(%)가 모두 14 % 미만이었으며 일내 및 일간 정밀성은 모두 14% 이하이었으며, 정확성도 모두 분석법 밸리데이션 기준 내에 들었다. 정량한계는 신호대 잡음비를 10 이상으로 하였을 때 50 ng/mL로 산출되었다. 용제첨가에 의한 제단백에 의한 유비데카레논 및 내부표준물질의 회수율은 모두 98 % 이상이었다. 분석법의 표준지침으로 칼럼으로는 역상 C18 칼럼(5 μm, 4.6 × 150 mm)을 쓰고 혈청검체 0.1 mL에 내부표준액 50 μL를 넣고 1-프로판올 850 μL를 넣어 섞고 단백을 제거한 다음 10 분간 원심분리하여 위의 맑은 액 40 μL를 HPLC에 주입한다. 이동상으로 초산나트륨삼수화물 · 빙초산 · 이소프로판올?메탄올?헥산혼합액(6.8 : 15 : 15 :690 : 280 w/v/v/v/v)을 써서 유속 1.2 mL/min으로 유출시키고 가드셀(+700 mV)과 분석셀(E1 -650 mV, E2 450 mV)을 써서 모두 환원시킨 다음 산화될 때의 신호를 측정하여 내부표준물질과 프라조신을각각 약 5.3 및 약 6.8 분에서 검출하여 50 ∼ 4000 ng/mL의 농도 범위에서 작성한 검량선으로부터 혈장 중 총 코엔자임 Q10 (유비데카레논)의 농도를 측정하였다. 투약전 48시산, 24시간 및 직전 그리고 유비데카레논 캡슐 5 mg을 20 캡슐 (100 mg) 물 350 mL와 경구투여한 후 0.5, 1,, 2, 4, 6, 8, 10, 12, 24, 48, 72, 96 및 144시간째에 채혈하여 혈장을 분리하여 분석시까지 -80℃에 보존하였다. 대조약으로 노브라민 캡슐을 투약한 경우는 흡수가 거의 없었다. 따라서 용출시험결과를 토대로 대조약을 데카키논 캡슐로 변경하여 유비데카레논 100 mg 해당량 (20 캡슐)을 투약하여 생체이용률 파라미터를 구하였다. 그 결과 16인의 피험자로부터 얻은 AUCt, Cmax, Tmax, Ke, 및 t₁/₂ 값은 각각 16.29±5.76 μg · hr/mL, 0.36 ± 0.14 μg/mL, 11.0 ± 17.1 hr, 0.0548 ± 0.152 hr⁻¹ 및 54.1 ± 28.8 hr,로 나타났다. 이러한 결과는 Ke, 및 t₁/₂ 값을 제외하고 생물학적동성평가지표인AUCt 및 Cmax,는 문헌에 보고된 내용과 유사하였다. 이상의 결과를 볼 때 이 연구에서 확립한 분석법과 반복 투약 생체이용률시험방법은 유비데카레논 제제의 생물학적동등성 시험의 표준적인 방법으로 활용될 수 있다고 생각된다.
○ 연구목표 : 본 연구에서는 의약품동등성 재평가 사업에 대비하여 그 대상성분인 유비데카레논을 선정하여 혈장 중 총 유비데카레논(코엔자임 Q10)의 분석법을 확립하고 경구투여 후 생체이용률시험을 수행하여 생물학적동등성시험 지침을 마련하고자 하였다. 이를 통해 유비데카레논 제제의 생물학적동등성시험을 원활하게 수행할 수 있도록 하며 의약품 동등성 시험관리의 효율화를 기할 수 있을 것으로 예상된다. 또한 모든 전문의약품의 허가에 있어 생물학적 동등성시험을 의무화하고 생물학적 동등성시험을 토대로 한 의약품 재평가가 원활히 수행될 수 있는 기반을 구축하는데 한 몫을 담당할 수 있을 것으로 기대된다.
○ 연구내용 : 유비데카레논 캡슐의 생체이용률시험은 혈중약물분석방법의 확립을 위해 제1세부기관(동덕여자대학교), 제2세부기관(이화여자대학교) 및 제3세부기관(강원대학교)의 3개 기관이 분석법을 검토하여 확립하고, 각각 확립된 분석법을 비교 고찰하여 표준분석법을 제시하였다. 이 방법으로 제1세부기관에서 노브라민 캡슐 10 mg을 대조약으로 하여 생체이용률을 시험하였고, 제2세부기관에서는 제1세부기관에서 얻은 결과를 바탕으로 대조약을 데카키논 캡슐 5 mg으로 변경하여 생체이용률시험을 수행하였으며, 제3세부기관에서도 데카키논 캡슐 5 mg을 대조약으로 하여 최종 시험법 지침 작성을 위한 생체이용률 시험을 수행하였다. 제2 및 제3기관으로부터 얻은 혈장 중 농도를 통계 처리하여 구한 혈장농도곡선아래면적(AUCt), 최고혈중농도(Cmax), 최고혈중농도 도달시간(Tmax), 소실속도정수(Kel), 소실반감기(T1/2β) 는 각각 16.29 ± 5.76 ㎍․hr/mL, 0.36 ± 0.14 ㎍/mL, 11.0 ± 17.1 hr, 0.0548 ± 0.152 hr⁻¹ 및 54.1 ± 28.8 hr,로 나타났다. 이러한 결과는 Ke, 및 t1/2 값을 제외하고 생물학적동성평가지표인 AUCt 및 C․max, 는 문헌에 보고된 내용과 유사하였다. 주관기관에서 각 기관의 시험결과를 총괄 검증하여 최종 유비데카레논 캡슐 제제의 표준 생체이용률시험 지침을 작성하였다.
○ 연구성과(응용분야 및 활용범위포함) : 유비데카레논 제제의 표준 생물학적동등성시험 표준지침을 마련함으로써 다음과 같은 효과를 기대할 수 있다. 첫째, 유비데카레논 제제의 동종약 간의 생물학적동등성시험의 수행을 신속히 수행하여 재평가 사업을 원활하게 할 수 있으며 대체조제를 원활히 하고 의약분업의 정착에 기여한다. 둘째, 한국인에 있어서 약물동태학적 파라미터의 확립으로 약물요법에 활용할 수 있다. 셋째, 유비데카레논의 새로운 제제 연구개발 및 약물동태연구에 필요한 in vivo 연구자료로 활용한다. 또한 유비데카레논 캡슐은 물론 기타 다른 유비데카레논 함유 복합제제 및 대체의약품(건강기능성식품)의 생체이용률평가를 위한 in vivo 연구의 시험자료로 활용할 수 있다.