Rubus coreanus miquel의 MCF-7 세포주에 대한 세포사멸 기전

국문 초록 (Abstract)

배경 및 목적
매년 서양 뿐 아니라 우리나라 여성들도 유방암이 증가하여 현재로는 여성의 암 중에서 1위를 차지하고 있다. 복분자(RCM)는 산딸기나무의 열매를 말린 것이며 강력한 항산화작용을 하며 암세포의 세포사멸(apoptosis)을 유발하고 암세포의 성장을 저해한다. 본 연구는 RCM이 MCF-7의 성장을 제어하는데 어떤 기전으로 작용하는지 알아보기 위해 실행하였다.

연구방법
본 연구에서는 RCM이 MCF-7 세포의 성장을 저해하는지 알아보기 위해 MTT 분석을 이용해 세포독성을 측정하였다. 이 세포의 성장억제가 세포주기(cell cycle)와 연관되었는지를 알아보기 위해 FACS 기기를 통하여 확인하고, 그 기전을 확인하기 위하여 세포사멸화 분자(apoptotic molecules)인 Fas, Bax, caspase-9, caspase-3, PARP 단백질들의 발현 변화를 확인하였다. 또한 세포성장 기전을 확인하기 위해 p-ERK, ERK, p-AKT, AKT, p-p53, p53 단백질들의 발현 변화를 확인하였다.

연구결과
RCM은 MCF-7 세포의 성장을 농도 의존적(dose-dependent)으로 저해하였다. RCM은 caspase-9, caspase-3, PARP의 발현을 유도하며 카스파제에 의한 세포사멸(caspases-dependent apoptosis)을 유도하였다. 또 RCM은 세포주기(cell cycle)에서 S phase (S 기)를 통해 조절하였다. 세포성장신호인 p-ERK, ERK, p-AKT, AKT, p-p53, p53을 조절하여 세포성장을 억제하였다.

결론
RCM은 유방암 세포인 MCF-7의 성장에 대해 카스파제에 의한 세포사멸(caspases-dependent apoptosis)을 유도하였고, S기를 통해 세포주기를 중지시키며, 세포성장을 억제하는 것을 보아 RCM은 유방암 세포인 MCF-7의 치료에 도움이 될 것으로 생각된다.

다국어 초록 (Multilingual Abstract)

Objective: About 20-30% of women with breast cancer have breast cancer. breast carcinomas are likely to be more aggressive and fast growing than other types of breast cancer. Rubus coreanus miquel (RCM) known as herbal medicine drug is traditional Korean medicine. The RCM has been much research. In this study, cell death occurred by two tendencies. Initially apoptosis happened by caspase caspase8, -9, -3, PARP. Second, anti- proliferation has occurred by ERK.

Methods: Cell viability was assessed by MTT assay. To examine an effect of RCM on cell viability in vitro, proliferation of MCF-7 was detected first. cell apoptosis, anti-proliferation of protein level was assessed by western blot assay. Cell cycle analysis by flow cytometry. We studied PI stain for change of cell cycle When MCF-7 cell is treated by RCM.

Results: RCM inhibited the growth of MCF-7 cells dose-dependently. RCM also induced strongly apoptosis, anti-proliferation in MCF-7. RCM induced caspases-dependent apoptosis producing the cleavage of apoptotic molecules such as Fas, cleaved caspase-3 and PARP. RCM decreased the level of Bax and cleaved caspase-9. RCM arrested cell cycle.

Conclusions: RCM suppressed cell growth and induced caspases- dependent apoptosis in MCF-7. RCM confirmed that it is useful for the treatment of the breast cancer.

목차 (Table of Contents)

• Ⅰ. 서론 1
• Ⅱ. 재료 및 방법 3
• 1. 재료 3
• 1) 약재 3
• 2) 기기 및 시약 3
• 3) 항체 3
• 4) 세포주 3
• 2. 방법 4
• 1) 세포독성도 조사 (MTT assay) 4
• 2) 세포형태 관찰 4
• 3) 세포주기 분석 (Cell cycle analyses by flow cytometry) 4
• 4) 단백질 발현 (Western blot assay) 4
• 3. 통계처리 5
• Ⅲ. 결과 6
• 1. 세포 생존률 (Cell viability) 6
• 2. 형태학적 관찰을 통한 세포사 (Cell death) 7
• 3. 세포주기에서 세포사 (Cell death in cell cycle) 9
• 4. Caspase 경로를 통한 세포사멸 기전 11
• 5. RCM에 의한 미토콘드리아 (mitochondria)의 세포사멸 12
• 6. 세포주기 (Cell cycle) 13
• 7. 세포 증식에 관한 RCM의 효과 15
• Ⅳ. 고찰 17
• Ⅴ. 결론 20
• 참고문헌 21
• ABSTRACT 26
• 국문초록 28