정제Vi장티푸스백신의 함량시험법 개선에 관한 연구 = Study on the Improvement of Content Test for Purified Vi Polysaccharide Vaccine

다국어 초록 (Multilingual Abstract)

Typhoid fever is caused by Salmonella typhi, whose capsular polysaccharide is called the Vi polysaccharide. Since the mid-1990s, typhoid vaccines including purified Vi polysaccharide were licensed in several countries and purified vi polysaccharide vaccines have been used widely around the world. The content test of the Vi antigen is important to assure the quality and consistency of purified Vi polysaccharide vaccine batches, and the immunochemical method and O-acetyl content test are used internationally. The rocket immunoelctroporesis(RIE) method, which is used for the immunochemical method, has variability of results from each person, and there is a difficulty to control the barbital reagent, which is used in a buffer, because of its psychotropic property. In this study, we intended to check the suitability of Enzyme Immunoassay (EIA) method as an alternative method which is based on a competitive method in control and release of Korean purified Vi polysaccharide vaccines and the possibility for the new content tests between manufacturers and NCL. The validation study was conducted on this new ELISA method according to ICH guideline and validation parameters such as accuracy, precision, specificity, linearity and range were all satisfied. Moreover, the results from NCL and 2 manufactures were compared to check the inter-laboratory reproducibility and showed the replaceability for the content test. Also, the O-acetyl content test, which is only conducted in a crude purified Vi polysaccharide in Korea, is recommended to test in the final bulk vaccines in European Pharmacopoeia (EP) and Official Control Authority Batch Release (OCABR). We intended to check the O-acetyl content in the final lots by Hestrin method. The suitability study was performed and the collaborative study with manufactures were conducted to decide the specification of the O-acetyl content. Hence, draft SOPs for the new content test(Competitive ELISA) and the O-acetyl content test were prepared. The new content test method and the O-acetyl content test will do for lot release after more tests and contribute to the international competitiveness and harmonization.

국문 초록 (Abstract)

장티푸스(Typhoid fever)는 Salmonella typhi라는 그람 음성균의 전신적 감염에 의해 발생하는 급성 감염성 질환으로, Salmonella typhi surface capsule에 있는 병원성을 나타내는 Vi 다당류(polysaccharide)가 백신의 주요 성분으로 이용되고 있으며, 특히 이 Vi 항원의 O-acetyl 기가 면역학적으로 중요한 역할을 한다고 알려져 있다. 이러한 Vi항원을 정제하여 만든 정제Vi장티푸스 백신의 경우 백신의 항원 함량 측정이 백신의 품질관리에 매우 중요하다. 국제적으로 정제Vi장티푸스 백신의 함량시험으로는 면역화학적 시험과 O-acetyl 함량시험이 사용되고 있다. 면역화학적 방법 중 현재 국내 정제Vi장티푸스 백신의 함량시험에 사용되고 있는 방법인 로켓법(rocket immunoelectoporesis, RIE)은 길이 측정 기준을 사람마다 달리 할 수 있고, 기관마다 측정 도구의 차이로 측정오차가 커서 정량적 측정이 정확하지 않아 보다 정확한 함량 측정을 위한 시험법 개선이 요구되고 있었다. 또한 전기영동에 쓰이는 barbital buffer의 경우 향정신성의약품으로 지정되어 있어 시약의 구입 및 관리가 복잡한 단점이 있어, 보다 시험자의 편차를 줄일 수 있고 경제적인 효소면역측정법(EIA)을 개발하여 국가검정시험법으로 대체 가능성을 확인하고자 하였다. 이 신규 시험법(Competitive ELISA)은 ICH 가이드라인에 따라 직선성, 특이성, 정밀성, 정확성에 대한 시험법 검증을 실시하였고 모두 만족함을 확인하였다. 이에 국내 제조사와의 공동연구로 재현성을 확인하여 대체 가능한 시험법임을 확인하였다. 또한 정제Vi장티푸스백신의 O-acetyl기 함량시험은 실제 백신의 면역학적인 활성을 보이는 O-acetyl기의 함량 기준을 확인하는 시험으로서, 유럽약전에는 원액 단계뿐만 아니라 완제의약품 단계에서도 수행하도록 설정되어 있지만 국내 제조사뿐만 아니라 국가검정에서도 실시하지 않고 있어 왔다. 따라서 국제조화 및 백신 생산의 일관성을 보증하는 품질 평가를 위해 국내 완제의약품에서도 O-acetyl기 함량측정을 해야 할 필요가 있어 본 연구에서 Hestrin 법을 이용하여 완제의약품에서 O-acetyl 함량을 측정하였다. Hestrin 법이 공정서 수재방법이므로 적합성을 통한 시험법 검증을 하였고 이에 만족함을 확인하였다. 국내 제조사와의 공동연구를 통해 제품별 O-acetyl 함량 기준을 확인하였다. 연구 성과로 새롭게 확립된 시험법(Competetive ELISA)과 O-acetyl 함량시험법에 대한 표준작업지침서(SOP) 안을 마련하였고, 이로써 국제경쟁력 확보와 추후 생물학적제제기준및시험방법의 고시 제정을 통한 국가검정시험법으로 활용할 수 있을 것이다.