Binding of Toxic Shock Syndrome Toxin-1 to HLA-DR and HLA-DQ Molecules by L-cell Transfectants = L-cell tranfectants를 이용한 Toxic Shock Syndrome Toxin-1과 HLA-DR, HLA-DQ 분자의 결합연구

국문 초록 (Abstract)

배경 : 포도구균에 의해 생산되는 TSST-1이 원인인 독성쇽증후군은 재래의 세균독소와는 달리 초항원으로 작용하는 기전에 의해 여러 장기에 병변이 합병되어 기능 부전을 초래한다. TSST-1이 초항원으로 작용하는 기전 중 TSST-1이 MHC와 결합하는 수용체를 밝히기 위하여 실험을 하였다.
방법
건강성인에서 말초혈액을 채취하여 말초혈액단핵구를 그리고 피부생검조직에서 정상 피부섬유원세포를 분리하였다. TSST-1이 결합하는 분자수용체를 동정하기 위한 방법으로 분자융합방법, 단클론항체, 결합능측정(binding assay), T cell proliferation assay을 이용하여 실험을 진행하였다. HLA-DRα, HLA-β1, HLA-DPw4β, HLA-DQ7α, HLA-DQw3β의 cDNA 클론을 expression vector에 selection amrker를 가진 plasmid pSV-neo를 Murine L-cell fibroblast에 transfection 시켜서 L-cell transfectants를 만들었고, Chloramine T를 이용한 iodination 한 TSST-1과 HLA-DR, DQ, DP의 결합능을 측정하였고 HLA-DR, DQ, DP에 대한 단클론항체로 억제한 뒤에 결합능과 비교하였다.
결과
TSST-1가 HLA-DR, DQ, DP의 결합능을 측정하고, 뒤이어 HLA-DR, DQ, DP에 대한 단클론항체로 TSST-1과의 결합을 억제시킬 수 있는지 보조세포 존재하에 증식능을 측정한 결과 HLA-DR에 대한 단클론항체는 TSST-1결합을 강력히 억제하는데 비하여 HLA-DP, HLA-DQ에 대한 단클론항체는 강하게 억제하지 못하였다.
결론
TSST-1은 HLA-DR L-cell transfectants와 결합하고, HLA-DQ L-cell transfectants에도 약간 결합하는 것으로 판단하여 TSST-1은 HLA-DR, HLA-DQ 분자의 특이부위에 결합하는 것이 관찰되었다. 초항원의 작용기전을 이해하는데 기초적인 설명을 가능하게 하는 것이다.

다국어 초록 (Multilingual Abstract)

Background : Expressible HLA class Ⅱa and cDNA were used for DNA-mediated gene transfer to produce L cell transfectants expressing single types of human class Ⅱ molecules. Cells with the highest degree of MHG class Ⅱ expression exhibited the highest number of TSST-l-binding sites. In contrast, cells with low or undetectable MHC class Ⅱ expression (resting T cells, and fibroblasts) exhibited very low or undetectable numbers of TSST-1-binding sites.
Methods' The relationship between surface MHC class Ⅱ molecules and TSST-1 binding sites was assessed by examining the effect of antibodies to MHC class Ⅱ molecules on TSST-I binding. We examined TSST-I binding to mouse L-cell transfectants that expressed HLA-DR. DQ, DP gene products.
Results : Immunofluorescence staining with anti-HLA-DR, -DP. and -DQ mAbs revealed comparable surface expression of the respective MHC class Ⅱ antigens by each of the three transfectants. TSST-1 bound to the HLA-DR transfectant and to the HLA-DQ transfectant but not to the HLA-DP transfectant and not to untransfected L cells.
Conclusion : In summary, monoclonal antibodies to HLA-DR. but not to HLA-DP or HLA-DQ. strongly inhibited TSST-1 binding. Binding of TSST-1 was shown to HLA-DR and HLA-DQ L cell transfectants.
These resu Its indicate that TSST-1 bind to distinct sites on HLA-DR and HLA-DQ molecules.