Aspergillus niger에서 단백질분해효소 결함 돌연변이주의 제조 및 특성규명

국문 초록 (Abstract)

A. niger를 숙주로 사용하여 이종유전자를 발현할 때 A. niger로부터 분비되는 단백질분해효소에 의해 생산된 단백질이 분해되는 문제점이 있기 때문에 단백질분해효소 결함 돌연변이주의 개발이 필요하다. 본 실험에서는 A. niger의 conidiospore를 자외선으로 처리한 후 skim milk plate에서 투명환 형성 능력을 측정함으로써 A. niger의 단백질분해효소 결함 돌연변이주들을 선별하고, 이들의 유전적 특성을 조사하였다. 선별된 돌연변이주들은 모균주에 비해 3-85% 정도의 단백질분해효소 활성을 가지고 있었으며, 특히 산성 조건하에서 단백질분해효소의 활성이 모균주의 3%와 49%를 가지고 있는 ANPD-129와 ANPD-153은 알칼리 조건하에서도 모균주의 27%와 13% 만을 가지고 있었다. 대부분의 단백질분해효소 결함 돌연변이주들과는 달리 ANPD-129와 ANPD-153은 모균주와 비슷한 생장속도를 보였다. 이 두 돌연변이주들 간에 형성된 이배체는 단백질분해효소를 모균주와 비슷하게 분비하였는데 이것을 통하여 두 돌연변이가 서로 다른 유전자 좌위에서 일어났다는 것을 알 수 있었다. ANPD-129와 ANPD-153을 대상으로 chromosome mapping을 수행한 결과 ANPD-129는 linkage group Ⅵ에 그리고 ANPD-153은 linkage group Ⅲ에 돌연변이가 일어난 것을 확인할 수 있었다.

다국어 초록 (Multilingual Abstract)

Isolation and Genetic Characterizstion of Extracellular Protease-deficien Mutants in Aspergillus niger. Heon Se Jeong, Suhn-Kee Chae^1, Hee Moon Park, Pil Jae Maeng and Jeong Yoon Kim^*. Department of Microbiology, Chungnam National University, Taejon 302-705, Korea, ^1Department of Biochemisty, Pai Chai University, Taejon 305-764, Korea-Several protease-deficient mutants of Aspergillus niger have been isolated by halo-screening on skim milk plate after UV irradiation of conidiospores. The extracellular proteolytic activities of the mutant strains grown in an optimized medium varied from 3% to 85% of that of the parental strain. Especially, two mutant strains named as ANPD-129 and ANPD-153, which had 3% and 49% of acid protease activity of the parental strain, respectively, were further characterized both physiologically and genetically. The growth rates of the mutants, ANPD-129 and ANPD-153, were similar to that of the parental strain, unlike other protease-dificient mutants. The diploid formed between the two mutants restored protease activity to a similar level of that of the parental strain. This result revealed that ANPD-129 and ANPD-153 had mutations at different loci. Using master strains with marked chromosomes these loci were assigned to linkage groups. The mutation locus (prt129) in ANPD-129 was assigned to linkage group Ⅵ and the locus (prt153) in ANPD-153 to linkage group Ⅲ.