겨우살이(Viscum album) 추출물의 항돌연변이원성 및 세포독성효과 = (The) effect on Antimutagenicity and Cytotoxicity to Viscum album extract

국문 초록 (Abstract)

본 연구는 강원도 대관령지역에서 자생하는 겨우살이를 가열, 탈지하여 추 출물의 항돌연변이 효과와 세포독성에 미치는 영향을 조사하였으며, 이에 따른 주요 연구 결과는 다음과 같다.
1. Ames test에서는 추출물을 plate 당 0.5, 1.0, 2.0mg씩을 주입한 결좌 돌연변이원성은 나타나지 많았으며, 항돌연변이원성실험에서는 돌연변이물질 4NQO에 대해서 TA 98과 TA 100에는 물 추출물에 대해서는 거의 나타나지 말았으나 메탄을 추출물에서는 각각 13, 15%의 억제 활성을 나타내였다. 또한 메탄을 추출물의 분획에서는 헥산, 클로름포름, 부탄올에서는 TA 98은 각각 37, 24, 12%, TA 100은 49, 32, 25%의 억제 활성을 나타내었다. 그러 므로 헥션분획은 37, 49%의 억제 활성을 나타내어 분획중 강한 항돌연변이 물질이 존재하는 것으로 추정되었다.
2. B. subtilis spore rec-assay에서는 추출물을 disc당 10, 20, 30㎕씩 주입한 결과 생육저지대의 차이가 없으나 5mm이하로 나타나 돌연변이 된성은 나 타나지 않았으며, 항돌연변이원성실험에서는 돌연변이물질인 MNNG에 대한 생육저지대가 시료마다 저하시키므로 항돌연변이 효과가 있는 것으로 나 타및다.
3, 세포독성 실험에 의한 MTT assay와 SRB assay에 대해서 겨우살이 추출물을 0.05~1.0mg/ml를 철가하였을 때 페암세포주(A4549)보다는 위암 세포주(SNU-1)에 대해서 더욱 효과적으로 나타났다.

다국어 초록 (Multilingual Abstract)

The shrub type Viscum album(Mistletoe) is known as Chrismas decoation tree in Europe and winter green plant in Orient which grow on the living oac tree, Lately a variey of medicinal usages of Viscum album were reported.
So this study is planed to investigate the possibility to use as the market wide medicinal material.
And in the first step, to investigate the physiological activities of Viscum album, we examined the mutagenicity and antimutagenic effect and cytotoxcity effect of the extract were examined.
The water and methanol extracts of Viscum album did not show the mutagenicity by the Ames test in the 0.5~2.0mg/plate and Spore rec-assay test in the 10~30㎕/disc.
The methanol extract showed the antimutagenic effect against Salmonella typhimurium TA 98 and TA 100 inducedby 4-nitroquinoline -N-oxide(4NQO) and Bacillus subtilis H 17(Rec^(+)) and M 45(Rec^(-)) induced by N-methyl -N'-nitro-N-nitrosoquanide(MNNG).
The hexane fraction showed comparatively higher antimutageic effect than other solvent fraction from the methanol extract. Solvent extract of Viscum album were tested for cytotoxcity effect against SNU-1 (human lung carcinoma cell) and A549(human stomach carcinoma cell) by colorimetric 3-(4,5-dimethylthiazol-2-yl) 2,5-di-phenyl tetrazolium bromide(MTT) and Sulforhodamine(SRB) protein assay.
The water and the metnaol extracts of Viscum album show the cytotoxcity by MTT assay and SRB assay in the conc. of 0.1~10mg/m1.
Thus, Viscum album were considered to have effective cytotoxcity activity against SNU-1 cell line in MTT assay and SRB assay.

목차 (Table of Contents)

• 목차
• Abstract = ⅰ
• Ⅰ. 서론 = 1
• Ⅱ. 실험재료 및 방법 = 3
• 1. 실험재료 = 3
• 1) 시료 = 3
• 2) 시약 = 3
• 3) 균주 및 동물세포 = 4
• 2. 실험방법 = 5
• 1) 시료의 제조 = 5
• 2) 돌연변이원성 및 항돌연변이원성 = 7
• (1) Ames Test medium의 조제 = 8
• (2) Mutagenicity Test = 10
• (3) Antimutagenicty Test = 11
• (4) B. subtilis spore rec-assay = 13
• 1. B. subtilis spore 조제 = 13
• 2. Spore rec-assay = 15
• 3) 세포독성 = 16
• (1) 동물세포배양 = 16
• (2) 동물세포의 접종세포주 = 17
• (3) Cytotoxcity 측정 = 17
• 1. MTT assay = 17
• 2. SRB assay = 20
• Ⅲ. 결과 및 고찰 = 22
• 1. Ames Test = 22
• 1) 돌연변이원성 = 22
• 2) 물 추출물과 메탄올 추출물의 항돌연변이 효과 = 24
• 3) 메탄올 추출물의 용매분획별 항돌연변이 효과 = 25
• 2. Spore rec-assay = 26
• 1) 돌연변이원성 = 26
• 2) 물 추출물과 메탄올 추출물의 용배분획별 항돌연변이 효과 = 27
• 3. 세포독성실험 = 28
• 1) MTT assay = 28
• (1) 물 추출물과 메탄올 추출물의 세포독성 효과 = 29
• (2) 메탄올 추출물의 용매분회별 세포독성효과 = 31
• 3) SRB assay = 33
• (1) 물 추출물과 메탄올 추출물의 세포독성효과 = 33
• (2) 메탄올 추출물의 용매분획별 세포독성효과 = 34
• Ⅳ. 적요 = 36
• Ⅴ. 참고문헌 = 37