내독소로 유도되는 Nuclear Factor Kappa B 활성화에 미치는 Src Family Kinase의 조절기전 = The Regulatory Mechanism of Src Family Kinase in Lipopolysaccharide (LPS) induced NF-κB Activation Pathway

국문 초록 (Abstract)

목적:
Src family tyrosine kinases (TK)가 내독소로 인해 유도되는 NF-kB 활성화 신호전달체계에 연관되어 있음이 보고된 바 있다. 또한 내독소(LPS)나 TNF a와 같은 여러 자극제는 IkB-a 의 serine기 또는 tyrosine기의 인산화를 통하여 NF-kB를 활성화 시킨다고 알려진 바 있다. 이에 본 연구에서는 RAW 264.7 대식세포에 내독소 투여 시 유도되는 NF-kB활성화 및 NF-kB 의존성 염증성인자 생성에 대한 Src TK의 역할에 대해 규명하고자 한다.
방법:
American Type Culture Collection 에서 구입한 생쥐의 대식세포, RAW264.를 내독소(LPS)에 노출시킨 후 damnacanthal나 PP1을 처리하여, EMSA, Nitrite assay, Western blot을 통하여Src TK가 NF-kB활성과 염증인자의 생성에 있어서 어떤 역할을 하는지에 대하여 조사하였고 내독소 투여로 인한 NF-kB활성에 있어서 Src TK의 기본적인 작용기전에 대해 조사하였다.
결과:
Damnacanthal이나 PP1은 Src TK 특이적 억제제로 알려져 있는데, 본 연구에서는 Src TK의 특이적 억제제인 damnacanthal 이나 PP1을 사용하였고, RAW 264.7 대식세포에서 Src TK 특이 억제제의 전처치는 내독소로 유도되는 NF-kB활성을 차단시켰다. 또한 내독소 투여로 증가된 NO 생성은 damnacanthal이나 PP1에 의하여 억제되었다. 이런 TK kinase 억제제는 내독소로 유도되는 serine 기 인산화와 IkB-a 분해를 억제시켰다.
결론:
Src kinase 특이적 억제제인 damnacanthal 그리고 PP1이 RAW 264.7세포에서 내독소로 유도되는 NF-kB활성과 Nitric Oxide 생성을 차단시켰다. 또한. Damna-canthal이나 PP1은 내독소로 유도된 serine기 인산화와 IkB-a의 분해를 억제시켰다.

다국어 초록 (Multilingual Abstract)

Objectives : Src family tyrosine kinases(TK) have been found to be involved in LPS induc-tion of signal cascades. Furthermore Lipopolysaccharide(LPS) or Tumor necrosis factor alpha (TNF-a) activate nuclear transcription factor kB(NF-kB) by inducing serine or tyrosine pho-sphorylation of the inhibitory subunit of NF-k B(I k B- a). In this study, it is our purpose to search the role of Src TK in LPS induced activation of NF-k B and NF-k B dependent induced inflam-matory factors.
Methods : Nuclear extracts were prepared from RAW 264.7 cells pretreated with damnacan-thal or PP1 and then stimulate with LPS. After that, we figured out the dffects of inhibition of Src family kinases on LPS-induced activation of NF-kB by EMSA. We investigated effects of damnacanthal of PP1 on the production of NO by Griess assay and LPS-induced serine phos-phorylation and degradation of Ik B-a by Western blots in LPS-stimulated RAW263.7 cells.
Results : Inhibition of Src TK with damnacanthal or PP1 blocked LPS-induced NF-kB acti-vation at the range of nanomolar concentrations. Substantial inhibition in LPS-induced production of NO was also observed in cells treated with damnacanthal or PP1. These kinase inhibitors blocked LPS-induced the serine phosphorylation, and the degradation of Ik B-a.
Conclusion : we investigated the role of Src TK in NF-k B activation and production of nitric oxide (NO) in LPS stimulated RAW 264.7 macrophages and the underlying mechanism by which Src TK play a role in LPS-induction of the possible pathways leading to NF-k B activation. Src kinase specific inhibitors, damnacanthal and PP1 blocked LPS induced activating NF-k B and producing Nitric Oxide in Raw 264.7 machrophages. Moreover, Damnacanthal and PP1 inhibited LPS induced serine phosphorylation and degradation of Ik B-a.

목차 (Table of Contents)

• Abstract
• 서론
• 대상 및 방법
• 1. 세포주와 세포배양
• 2. 핵단백 추출 및 젤지연분석
• 3. Nitrite assay in cultured cell
• 4. Western blot 분석
• 5. 통계분석
• 결과
• 1. Damnacanthal과 PP1이 RAW264.7세포에서 1. NF-кB활성화에 미치는 영향
• 2. Damnacanthal과 PP1이 내독소로 유도되는 NO 1. 생성에 미치는 영향
• 3. Damnacanthal과 PP1이 serine기 인산화 및 1. IκB-α에 미치는 영향
• 고찰
• 요약
• References