젤라틴에 의한 면역 반응 측정법 개발, 2002 = Assay system for immune response to gelatin

다국어 초록 (Multilingual Abstract)

Gelatin containing vaccines occasionally induce allergic reactions including anaphylaxis, and anti -gelatin IgE has been detected in sera obtained from patients with systemic immediate-type reactions. Furthermore, all the patients sensitized by gelatin develop gelatin specific lymphocyte proliferation activity. Even though the patients with systemic nonimmediate-type reactions do not produce any anti-gelatin IgE, some of them have identified to produce gelatin specific IgG. In this study we tried to setup a sensitive method to detect anti-gelatin antibodies in human sera. Since the levels of anti-gelatin antibodies are little in sera, large amount of sera should be used. Anti-gelatin IgG could be measured by an indirect ELISA using a colorimetric (OPD) substrate. However, anti -gelatin IgE could not be detected using the colorimetric substrate, therefore the chemiluminescent substrate was used. The Japanese reference serum (JR) obtained from a patient with gelatin allergy was used as a positive control. It found to contain high concentrations of both anti-gelatin IgG and IgE, indicating that our system is useful for detection of anti -gelatin antibodies. Of 26 antisera two patient sera, DS-3 and CS-6, also were also proved to have relatively higher concentration of IgG and IgE specific to gelatin. Anti -gelatin IgGs in 5 sera showed low affinities to gelatin, but anti-gelatin IgEs in those sera were found to have relatively higher affinities to gelatin. Two antibodies in two sera, DS-8 and CS-3, showed nonspecific binding patterns. Both wells with and without gelatin coating showed relatively high reactivity to both IgG and IgE in those sera. The other sera were found to contain little anti-gelatin IgGs and IgEs. Since there are very small amount IgE in sera. we tried to make a system for detection of anti-gelatin IgE. After capturing the human IgE using anti-human IgE mouse monoclonal antibody, biotinylated gelatins bound to the human IgE. However. no specific binding was found in all the samples tested including DS · :3. The gelatins on the glass slide were found to use for detecting anti- gelatin antibody in sera with high sensitivity.

국문 초록 (Abstract)

Ⅰ. 제 목
젤라틴에 의한 면역반응 측정법 측정
Ⅱ. 연구개발의 목적 및 필요성
가. 연구개발의 목적
백신 제조시 안정제로 사용되고 있는 젤라틴에 대한 과민한 알레르기 반응들이 보고들이 최근 증가되고 있다. 본 연구에서는 알레르기 환자 혈청에서 항젤라틴 항체를 고감도로 측정하고, 젤라틴 특이 임파구 증식을 측정하여 젤라틴에 의한 면역반응 측정 방법을 확립하고자 한다.
...[중략]원문참조○ 연구목표 : 백신 제조시 안정제로 사용되고 있는 젤라틴에 대한 과민한 알레르기 방응들이 보고들이 최근 증가되고 있다. 본 연구에서는 알레르기 환자 혈청에서 항 젤라틴 항체를 고감도로 측정하고, 젤라틴 특이 임파구 증식을 측정하여 젤라틴에 의한 면역반응 측정 방법을 확립하고자 한다.
○ 연구내용
-항 셀라틴 IgG 측정
일반적으로 혈청내 항 젤라틴 항체의 수준은 젤라틴 특이 면역반응을 지닌 사람이라 이라 할지라도 대단히 낮다. 그러므로 감도를 높이려면 다량의 혈청을 사용하여야 한다. 본 연구에서는 10 및 30 ㎕의 시료볼 검체 희석액에 희석하여 200 ㎕가 되게 만들고, 비폭이 반응을 낮출 수 있는 검체 희석액을 제조하고자 하였으며, 발색기질을 사용하는 indirect ELISA 법에 의하여 항 젤라린 IgG를 축정하고자 하였다.
-항 젤라틴 IgG 측정
혈액내 IgE level은 IgG에 비하여 1/100,000 이하이다. 그러므로 일반적인 발색 기질을 사용한 ELISA 법으로는 항 젤라틴 항체를 효과적으로 측정할 수가 없다, 본 연구에서는 감도가 매우 높은 발광기질 을 사용하는 indirect ELISA 법으로 항 젤라틴 IgE를 축정 하였다.
-Biotinylated 젤라틴을 이용한 항 절라틴 IgE 측정법 개발
농도가 낮은 IgE가 젤라틴에 결합할 경우 IgG와 결합시 경쟁을 하여 감도가 낮아질 가능성이 많으므로, IgE를 capture하고 biotinylation된 젤라틴을 결합시켜, 항 젤라틴 IgE를 측정법음 개발하고자 하였다.
-단백질 칩을 이용한 항 젤라틴 항체 측정법 개발
본 측정법은 혈청이 30 때 이상으로 매우 많이 소요된다, 그러므로 본 연구에서는 이 룰 해결하고자 소량의 시료로도 항 젤라틴 항체를 측정하고자，slide glass에서 형광면역 검사법율 사용하여 항 젤라틴 항체를 검사하는 측정법을 개발하고자 하였다.
-젤라틴을 마우스에 면역화
소 및 왜지의 젤라틴을 Freunds adjuvant 면역보조체로 하여 마우스에 주사하고, 젤라틴 특이 항제 및 임파구를 제조하고자 하였다.
○ 연구성과(응용분야 및 활용범위포함) : 백신 주사시 systemic immediate 면역반응이 일어날 경우 항 젤라틴 항체 (IgG 및 IgE)가 검출되는데 본 연구에서 확립한 검사법을 이용하여 이와 같은 부작용올 미리 예방할 수 있을 것이다. 또한 아토피성 피부염 등 현재 심각한 문제들을 일으키고 있는 음식물 알러지중 젤라틴에 기인한 반응을 알 수 있다. 그리고 단백질 칩에 의한 항 젤라틴 항체 검사법은 추후 liigh-thvough-screening (HTS>에 응용할 수 있으리라 여겨진다.