SAMDC 유전자 과다발현을 이용한 내병성, 내염성, 내한성 장미 신품종 개발에 관한 연구 = (The)studies on developing the new cultivar of roses against various stresses, such as salts, cold and pathogens, by overexpressing SAMDC

목차 (Table of Contents)

• 목차
• 제1장 연구개발과제의 개요 = 17
• 1절 연구개발의 필요성 = 17
• 1. 기술적 측면 = 18
• 2. 경제·산업적 측면 = 21
• 3. 사회·문화적 측면 = 23
• 제2장 국내·외 기술개발 현황 = 24
• 1절 국내 관련 기술의 현황과 문제점 = 24
• 2절 국외 관련 기술의 현황과 문제점 = 25
• 3절 본 연구진의 기술 현황 및 문제점 = 27
• 4절 앞으로 전망 = 33
• 5절 기술도입의 타당성 = 34
• 제3장 연구개발 수행 내용 및 결과 = 35
• 1절 연구개발 방법 및 설계 = 35
• 1. 장미 형질전환용 construct 제조 = 35
• 2. 형질전환 장미 제조 = 35
• 3. 형질전환 장미의 환경저항성, 내병성, 개화정도, 화질 및 수확 후 저장성 조사 = 35
• 4. 형질전환 장미의 항산화효소군 및 PR 유전자군의 유전자 발현 조사 = 36
• 5. 형질전환 장미의 농가보급형 삽목묘／접목묘 개발 = 36
• 2절 연구개발 추진체계 = 38
• 3절 연구수행 방법 = 39
• 1. 제1세부과제 = 39
• 가. SAMDC uORF의 활성 및 기능분석 = 39
• 1) GUS 활성 측정 = 39
• 2) PCR(polymerase chain reaction) 분석 = 39
• 3) In vitro transcription／translation 반응 = 39
• 4) In vitro transcription 반응 = 40
• 5) In vitro translation 반응 = 40
• 6) 총 RNA 분리 = 40
• 7) 방사능 표지 probe 제조 = 41
• 8) Northern blot 분석 = 41
• 9) 핵 추출 = 41
• 10) Nuclear run-on assay = 42
• 11) Primer extension 분석을 위한 reverse primer 제조 = 42
• 12) Primer extension 분석 = 43
• 13) DNA 염기서열분석 = 43
• 14) In vitro phosphorylation assay = 43
• 15) Agrobacterium tumefaciens 내로 construct 플라스미드의 도입 = 44
• 16) 형질전환 담배의 제조 = 44
• 나. 장미 재분화 시스템 확립 및 형질전환 수행 = 45
• 1) 장미 형질전환용 Construct 제조 = 45
• 2) 장미 macropropagation 시스템 확립 = 45
• 3) 장미 형질전환 시스템 확립 = 46
• 가) 장미 조직을 통한 형질전환 시스템 확립 = 46
• 나) Somatic embryo 유도 = 46
• 4) 유도된 장미의 somatic embryo에 Agrobacterium 도입 = 46
• 5) Synthetic peptide를 이용한 형질전환 = 47
• 2. 제2세부과제 = 49
• 가. 형질전환 장미의 특성조사 및 실용화 기술개발 = 49
• 1) 형질전환용 장미 유전자원 특성조사 및 선발 = 49
• 2) 품종별 장미 화질 및 신선도 유지에 대한 폴리아민의 영향 = 51
• 3) 형질전환 식물체 순화, 번식, 계통전개 및 간이특성조사 = 51
• 4절 연구수행 결과 = 52
• 1. 제1세부과제 = 52
• 가. SAMDC uORF의 활성 및 기능분석 = 52
• 1) SAMDC uORF의 단백질 합성 억제 = 52
• 가) SAMDC uORF 및 point mutation을 이용한 재조합 constructs 제조 = 52
• 나) In vitro transcription／translation(TNT) 반응을 이용한 GUS 활성 변화에 미치는 uORF의 영향 = 54
• 다) SAMDC uORF를 포함한 5'-UTR의 영향 = 58
• 3) uORF에 의한 mRNA의 steady-state level 조절 = 59
• 4) 폴리아민에 의한 feedback inhibition 조절 효과 = 62
• 5) SAMDC uORF protein 의 subcellular localization = 64
• 6) SAMDC uORF-GFP protein 의 phosphorylation = 68
• 가) SAMDC uORF protein 의 amino acid 구조분석 = 68
• 나) Point-mutation을 이용한 phosphorylation site 확인 = 70
• 7) SAMDC uORF의 작용기작 분석 = 73
• 가) SAMDC uORF에 의한 ribosome stalling = 73
• 나) uORF protein phosphorylation site의 point mutation에 의한 leaky scanning mechanism = 76
• 8) SAMDC uORF-GFP construct를 이용한 형질전환 담배 식물체와 BY-2 cell 제조 = 78
• 나. 장미형질전환 기술 개발전략 및 장미 조직의 배양 = 81
• 1) 장미형질전환 기술 개발전략 = 81
• 2) 신초를 이용한 식물체 개발 기술 = 81
• 3) 장미 조직으로부터 callus 및 embryo 유도 기술 = 85
• 가) 장미의 조직 중 petiole을 이용하여 callus를 유도 = 85
• 나) Embryogenic callus 유도 기술 = 89
• 다) Somatic embryo 유도 = 92
• 4) 장미의 형질전환 기술 = 93
• 가) 형질전환기술 = 93
• 나) Peptide를 이용한 형질전환기술 개론 = 94
• (1) Agrobacterium을 이용한 형질전환 = 95
• (가) 신초 유도과정을 이용한 Agrobacterium 도입 = 95
• (나) 장미 측아에 Agrobacterium을 도입 = 97
• (다) 장미 embryo callus에 유전자를 포함한 Agrobacterium을 도입 = 98
• ① 장미의 조직 중 petiole에 유전자를 포함한 Agrobacterium 도입 = 98
• ② Embryogenic callus에 Agrobacterium 도입 = 99
• ③ somatic embryo callus에 Agrobacterium 도입 = 99
• (2) Peptide를 이용한 형질전환 = 100
• (가) Somatic embryo의 형질전환 = 101
• (나) 장미의 조직을 이용한 형질전환 = 102
• 다. 장미의 화질 및 신선도 유지에 대한 폴리아민의 생리적 역할 규명 = 103
• 1) Ethylene 생성량 분석 = 103
• 2) SAMDC 활성 분석 = 103
• 3) 호르몬에 따른 장미의 신선도 및 화질 = 108
• 라. 적요 = 113
• 2. 제2세부과제 = 116
• 가. 형질전환 장미의 특성조사 및 실용화 기술개발 = 116
• 1) 형질전환용 장미 유전자원 특성조사 및 선발 = 116
• 2) 품종별 장미 화질 및 신선도 유지에 대한 폴리아민의 영향 = 131
• 3) 형질전환 식물체 순화, 번식, 계통전개 및 간이 특성조사 = 134
• 4) 적요 = 134
• 제4장 목표달성도 및 관련분야에의 기여도 = 135
• 1절 연구개발 목표와 내용 및 평가의 착안점 = 135
• 1. 연구개발 목표 = 135
• 2. 연구평가의 착안점 = 136
• 2절 연구개발 목표의 달성도 = 137
• 1. 1차년도 계획대비 진도표 = 138
• 2. 2차년도 계획대비 진도표 = 139
• 3. 3차년도 계획대비 진도표 = 140
• 제5장 연구개발결과의 활용계획 = 141
• 1절 기대효과 = 141
• 1. 기술적 측면 = 141
• 2. 경제·산업적 측면 = 141
• 2절 활용방안 = 142
• 제6장 참고문헌 = 143