TM4SF5 조절이 RhoA의 활성 및 암세포의 이동에 미치는 영향 = Effects of TM4SF5 Regulation on RhoA Activity and Tumor Cell Migration

국문 초록 (Abstract)

Transmembrane 4 Superfamily member 5(TM4SF5)는 간암, 췌장암에서 과발현 되는 막단백질로서 암세포의 성장과 전이에 관련된 인자로 알려져 있다. 본 연구팀은 선행연구에서 human TM4SF5의 일부 서열로 구성된 peptide(hTM4SF5R2-3)에 특이적인 모노클론 항체를 생산한 바 있다. 본 연구에서는 TM4SF5가 과발현 되어 나타나는 암세포에서 hTM4SF5R2-3에 대한 항체를 처리했을 때 나타나는 효과와 관련 기전을 확인하고자 하였다. 우선 hTM4SF5R2-3에 대한 항체를 처리하여 간암세포와 대장암세포의 성장과 세포의 이동이 저해되는 현상을 관찰하였다. 이러한 현상을 일으키는 분자 메커니즘을 조사하기 위하여 p27kip1의 세포내 위치, RhoA와의 상호 결합정도, RhoA의 활성을 조사하였다. hTM4SF5R2-3에 대한 항체의 처리에 의해 p-p27kip1이 탈인산화 되며, 세포질에서 핵 속으로의 이동이 일어나는 것을 관찰하였다. 또한 p-p27kip1의 탈인산화와 함께 RhoA와의 결합 정도가 감소하였으며, RhoA의 활성화가 일어나는 것을 확인하였다. 따라서 hTM4SF5R2-3에 대한 항체는 p27kip1과 RhoA의 상호결합을 억제하고 RhoA 신호전달에 의해 암세포의 성장과 이동을 저해시키는 효과가 있는 것으로 보인다.

목차 (Table of Contents)

• Ⅰ. 서 론 1
• 1.1 TM4SF의 구조와 기능 1
• 1.2 TM4SF5 1
• 1.2.1 TM4SF5의 구조 1
• 1.2.2 암세포에서 TM4SF5의 신호전달 기전 3
• 1.3 p27kip1 5
• 1.3.1 p27kip1의 RhoA 활성을 통한 세포의 migration 조절 6
• 1.4 간암과 대장암 8
• 1.5 펩티드 백신 10
• 1.5.1 CpG DNA 10
• 1.5.2 Liposome 11
• 1.5.3 연구 목적 11
• Ⅱ. 실험 재료 및 방법
• 2.1 Cell culture 12
• 2.2 MTT assay 12
• 2.3 Wound-healing assay 12
• 2.4 RhoA activity assay 13
• 2.5 Immunoprecipitation 13
• 2.6 Western blot 14
• 2.7 Confocal microscopy 14
• 2.8 RT-PCR 15
• Ⅲ. 결 과
• 3.1 간암 세포주와 대장암 세포주에서 TM4SF5의 발현 수준 17
• 3.2 Anti-hTM4SF5R2-3 항체에 의한 암세포주의 성장 저해 효과 19
• 3.3 Anti-hTM4SF5R2-3 항체에 의한 암세포주의 이동성 저해 21
• 3.4 Anti-hTM4SF5R2-3 항체에 의한 p27kip1의 위치변화 23
• 3.5 Anti-hTM4SF5R2-3 항체에 의한 p-p27kip1과 RhoA의 상호결합의 변화 25
• 3.6 Anti-hTM4SF5R2-3 항체에 의한 RhoA 활성의 변화 27
• 3.7 Anti-hTM4SF5R2-3 항체에 의한 RhoA 하위 신호전달의 변화 29
• 3.8 TM4SF5 발현 여부에 따라 차별적으로 발현되는 유전자의 선별 31
• Ⅳ. 고 찰 35
• Ⅴ. 결 론 38
• 참고문헌 39