전사조절인자 TTF-1에 의한 뇌 유전자발현 조절에 관한 연구

국문 초록 (Abstract)

목표 1. 새로운 시간유전자인 TTF-1의 발현 변화와 시간유전자와 상호작용관계를 규명함.
① TTF-1 promoter 지역을 SEAP vector에 cloning 하여 TTF-1 유전자의 일주기성을 증명한다.

② 시간 유전자에 대한 TTF-1의 일주기성 리듬의 변화를 조사하기 위해, CLOCK/BMAL1 expression vector를 TTF-1 SEAP vector와 함께 선택된 신경세포주에 transfection 하여 증명한다.

③ 수분 항상성 조절기관 (CVO)에서 TTF-1 유전자의 mRNA가 일주기성 리듬을 가지는지 증명하기위해 TTF-1 mRNA probe를 이용한 RNase protection assay (RPA)를 수행함.

④ Lentivirus system을 이용하여 CLOCK/BMAL1의 유전자 발현을 억제하였을 때 TTF-1의 발현의 변화를 SEAP assay를 이용하여 조사함.


목표 2. CVO에서 TTF-1과 수분항상성 조절 유전자 RAS의 일주기성리듬을 규명함
① AoGen 유전자의 일주기성 리듬을 조사하기 위해 AoGen SEAP vector를 cloning하여 일주기성 리듬을 증명함.

② AoGen SEAP vector의 일주기성 리듬이 TTF-1 expression vector의 transfection을 통해서 어떻게 변화하는지 조사한다.

③ CVO 조직에서 TTF-1의 합성억제가 혈압의 일주기성에 직접적인 변화를 주는지 조사하기 위해 TTF-1 siRNA를 실험동물의 CVO에 주입한 후 혈압의 변화를 측정한다.

④ CVO 조직에서 TTF-1의 합성촉진이 혈압의 일주기성에 어떠한 변화를 주는지 조사하기 위해 재조합 TTF-1 단백질 (Met-Met TTF-1)을 실험동물의 SFO에 주입한 후 혈압의 변화를 측정한다.

⑤ CVO 조직에서 AoGen 유전자의 일주기성 리듬을 증명하게 위해 AoGen mRNA probe를 이용한 RPA를 수행한다.





목표 3. TTF-1의 유전자 발현에 변화를 주는 세포 신호전달 체계 규명
① 일주기성 리듬에 변화를 주는 neurotransmitter(adrenergic input), 또는 glucocorticoid를 신경세포 GT1-7 cell에 처리한 후 세포내 TTF-1 단백질과 mRNA 변화량을 Western blot, RT-PCR 방법으로 증명한다.

② TTF-1 SEAP vector의 일주기성 리듬이 neurotransmitter, 또는 glucocorticoid에 의해 어떠한 변화를 보이는지 조사한다.

③ Neurotransmitter의 세포내 신호전달과정(cell signal transduction)에서 TTF-1 유전자 발현은 어떠한 pathway를 통하는지 PKA, PKC antagonist를 처리하고 TTF-1 SEAP vector의 activity를 측정한다.