Aflatoxin B_1의 검출을 위한 효소면역측정법의 개발 = Development of an Enzyme-Linked Immunosorbent Assay for the Detection of Aflatoxin B_1

국문 초록 (Abstract)

효소면역측정법에 의한 aflatoxin B_1(AFB_1)의 정량법을 개발하기 위하여, 항체를 생산 정제하여 분석법을 확립하고 직접법과 간접법(direct/indirect competitive ELISA)의 특성 및 문제점을 비교·검토하였다. Bovine serum albumin(BSA)을 carrier protein으로 한 AFB_1-1-(0-carboxymethyl)oxime-BSA를 토끼에 면역하여 항AFB_1항혈청을 생산하였다. 정량 침강반응에 의하여 항혈청으로부터 항BSA항체를 제거하고 황산암모늄 침전법 및 DEAE-Sephadex A-50 이온교환 크로마토그래피를 통하여 순도 높은 IgG항체를 정제하여 항AFB_l항체로 사용하였다. 이 항체는 2×10^6이상의 높은 항체가를 갖고 있었으며, AEB_1의 유사독소인 G_2, B_2, G_1에 대하여는 3∼34%의 낮은 교차반응성을 보여 특이성이 비교적 높았다. 직접법 및 간접법의 분석조건을 확립한 후, AFB_1 표준품에
대하여 작성한 표준곡선으로부터 각 방법에 의한 AFB_1의 검출농도는 각각 0.2∼20 및 1∼10,000 ng/㎖(ppb)로 나타나, 직접법이 간접법보다 검출농도의 범위는 좁으나 감도가 더 높았다. 직접법은 분석의 안정성, 간편성, 신속성 등의 면에서 간접법보다 실용화에 적합한 것으로 나타났다.

다국어 초록 (Multilingual Abstract)

In order to develop an enzyme-linked immunosorbent assay(ELISA) for detecting aflatoxin B_1(AFB_1), we produced and purified antibodies, thereafter established and evaluated methods of direct and indirect competitive ELISA. Anti-AFB_1 antisera, produced by immunizing rabbits with AFB_1-1-(0-carboxymethyl)oxime-bovine serum albumin conjugate(AFB_1-BSA), were removed of anti-BSA antibodies by quantitative precipitation reaction and further purified by ammonium sulfate precipitation and DEAE-Sephadex A-50 ion exchange chromatography. Purified IgG fractions were used as anti-AFB_1 antibodies. The antibodies, whose titer was determined extremely high above 2×10^6, showed low cross-reactivity of 3∼34% against AFB_1 analogues such as G2, B2, and Gl. From the standard curves of direct and indirect competitive ELISA for AFB_1, the detection ranges were found 0.2∼20 and 1∼10,000 ng/㎖(ppb) respectively. In their sensitivity, stability, simplicity, and rapidity, the direct method was more suitable than the indirect method for practical use.