반응표면분석법을 이용한 Leuconostoc mesenteroides SRCM201425의 만니톨 생산배지 최적화

국문 초록 (Abstract)

본 연구에서는 경제성 있는 생물학적 만니톨 고생산을 위해 선별균주의 만니톨 생산 최적화 배지조성을 RSM 방법을 이용하여 확립하고자 하였다. 먼저 김치로부터 분리된 10균주의 만니톨 생산량과 과당으로부터 만니톨 전환율 분석을 통하여 SRCM201425 균주를 선발하였으며, 선발균주는 16S rRNA 유전자 염기서열과 당 발효 분석을 통하여 Leuconostoc mesenteroides로 동정하였다. Plackett-Burman design (PBD)을 이용하여 만니톨 생산에 영향을 주는 배지 인자를 선별하기 위해 총 11개의 탄소원, 질소원, 무기원소의 영향을 조사하였으며, 통계학적 분석을 통하여 최종적으로 fructose와 sucrose, peptone을 선정하였다. 만니톨 생산을 위한 선별된 각 변수의 최적 농도를 결정하기 위한 방법으로 central composite design (CCD)과 반응표면 분석법을 이용하였으며, 최종적으로 CCD를 통해 만니톨 생산을 위한 배지 조성의 최적 농도는 fructose 38.68 g/l, sucrose 30 g/l, peptone 39.67 g/l으로 예측되었으며, 통계학적 분석을 통해 실험모델의 적합성을 확인하였다. 최종적으로 MRS 배지에서의 생산량의 약 20배의 만니톨을 생산할 수 있었으며, 100 g/l의 fructose가 포함된 MRS 배지 대비 97.46%의 만니톨을 생산하면서, 산업화시 기존 배지 대비 생산비용을 크게 절감할 수 있을 것으로 예상되었다. 본 연구를 통하여 만니톨생산을 위한 배지 조성의 최적화를 확립하였으며, 만니톨을 생산하기 위한 방법으로 주로 사용되고 있는 고비용의 촉매환원 방법을 대체할 방법을 제시할 수 있는 기초자료로 활용될 수 있을 것으로 기대된다.

다국어 초록 (Multilingual Abstract)

This study was undertaken to establish optimum medium compositions for cost-effective mannitol production by Leuconostoc mesenteroides SRCM201425 isolated from kimchi. L. mesenteroides SRCM21425 from kimchi was selected for efficient mannitol production based on fructose analysis and identified by its 16S rRNA gene sequence, as well as by carbohydrate fermentation pattern analysis. To enhance mannitol production by L. mesenteroides SRCM201425, the effects of carbon, nitrogen, and mineral sources on mannitol production were first determined using Plackett-Burman design (PBD). The effects of 11 variables on mannitol production were investigated of which three variables, fructose, sucrose, and peptone, were selected. In the second step, each concentration of fructose, sucrose, and peptone was optimized using a central composite design (CCD) and response surface analysis. The predicted concentrations of fructose, sucrose, and peptone were 38.68 g/l, 30 g/l, and 39.67 g/l, respectively. The mathematical response model was reliable, with a coefficient of determination of R² = 0.9185. Mannitol production increased 20-fold as compared with the MRS medium, corresponding to a mannitol yield 97.46% when compared to MRS supplemented with 100 g/l of fructose in flask system. Furthermore, the production in the optimized medium was cost-effective. The findings of this study can be expected to be useful in biological production for catalytic hydrogenation causing byproduct and additional production costs.

목차 (Table of Contents)

• 서론
• 재료 및 방법
• 결과 및 고찰
• References
• 초록

참고문헌 (Reference)

1 정수지, "전통 장류 유래 Bacillus subtilis SCJ4의 특성확인 및 통계학적 방법을 이용한 배양조건 최적화" 한국미생물학회 51 (51): 48-60, 2015

2 서지원, "순창 전통 메주 유래 Lactobacillus brevis SCML 432의 특성 및 통계학적 방법을 활용한 배양 조건 최적화" 한국식품저장유통학회 25 (25): 397-410, 2018

3 하광수, "반응표면분석법을 이용한 항균활성을 가지는 Bacillus subtilis SRCM102046의 균체 증량을 위한 배지 최적화" 한국식품저장유통학회 25 (25): 613-624, 2018

4 봉기문, "반응 표면 분석법을 사용한 Rhodobacter sphaeroides PS-24 유래 carotenoid 생산 배지 최적화" 한국유기농업학회 25 (25): 135-148, 2017

5 양희종, "반응 표면 분석법을 사용한 Bacillus subtilis NC1 유래 cellulase 생산 배지 최적화" 한국생명과학회 25 (25): 680-685, 2015

6 김명동, "만니톨 생산성이 우수한 Leuconostoc mesenteroides KCTC13305 균주의 생육특성" 농업생명과학연구원 30 (30): 41-49, 2018

7 Zhang, Z., "The effect of dextransucrase gene inactivation on mannitol production by Leuconostoc mesenteroides" 55 : 35-40, 2015

8 Saitou, N., "The Neighbor-joining method : a new method for reconstructing phylogenetic trees" 4 : 406-425, 1987

9 JOSHI, SANKET, "Statistical Optimization of Medium Components for the Production of Biosurfactant by Bacillus licheniformis K51" 한국미생물·생명공학회 17 (17): 313-319, 2007

10 Grobben, G. J., "Spontaneous formation of a mannitol-producing variant of Leuconostoc pseudomesenteroides grown in the presence of fructose" 67 : 2867-2870, 2001

11 Yun, J. W., "Production of mannitol by Lactobacillus sp, KY-107" 11 : 374-379, 1996

12 Yun, J. W., "Mannitol production by Aureobasidium pullurans" 9 : 140-146, 1994

13 Otgonbayar, Gan-Erdene, "Mannitol Production by Leuconostoc citreum KACC 91348P Isolated from Kimchi" 한국미생물·생명공학회 21 (21): 968-971, 2011

14 이형로, "Leuconostoc mesenteroides의 화학적 돌연변이를 통한 만니톨 생산능 향상: 고속 대량 선별 기술 개발" 한국생물공학회 28 (28): 213-215, 2013

15 유선균, "Leuconostoc mesenteroides sp. strain JFY 균주에 의한 만니톨 발효 조건의 최적화" 한국생명과학회 15 (15): 374-381, 2005

16 Andreevskaya, M., "Lactobacillus oligofermentans glucose, ribose and xylose transciptomes show higher similarity between glucose and xylose catabolism-induced responses in the early exponential growth phase" 17 : 539-, 2016

17 Ghoreishi, S. M., "Innovative strategies for engineering mannitol production" 20 : 263-270, 2009

18 Yue, M., "Improvement of mannitol production by Lactobacillus brevis mutant 3-A5 based on dual-stage pH control and fed-batch fermentations" 29 : 1923-1930, 2013

19 정은지, "Development of Cabbage Juice Medium for Industrial Production of Leuconostoc mesenteroides Starter" 한국미생물·생명공학회 27 (27): 2112-2118, 2017

20 Ryu, B. H., "Characteristics of mannitol production by Leuconostoc sp, KY-002" 11 : 636-641, 1996