HCV 항체 진단 키트 정도관리를 위한 참조 패널 설정(Ⅱ) = Establishment of reference panel for quality assaurance of diagnositc anti-HCV kit(II)

국문 초록 (Abstract)

우리나라의 C형 간염바이러스 감염에서 anti-HCV의 양성률은 1.0-1.8%미만으로 보고되고 있다. anti-HCV 항체를 측정하여 검출하는 방법을 이용하여 C형 간염바이러스의 감염을 확인하는 ELISA방법에서 부정확성에 대한 보고가 많이 있다. 항 HCV 진단의 참조 패널 설정 방안 확립으로 인천 적십자에서 anti-HCV 양성 혈장 샘플 70팩을 수집하여 RT-PCR을 하여 typing을 하였고 ELISA를 행하여 기준을 마련하고자 하였다. 결론적으로 ELISA kit의 제조회사간의 차이가 너무 많이 나타남. anti-HCV 항체에 대한 국가표준품의 제조에 문제점이 많은 부분에 대해서는 각각의 제조회사별 kit의 표준화가 이루어져야 일정한 표준치의 산정을 할 수 있을 것으로 사료됨.○ 연구목표
간염 C 형 바이러스를 검출하는 방법에는 RT-PCR, ELISA방법이 있다. RT-PCR을 직접적인 방법이지만 실험자의 숙련도에 따라 많은 차이를 보이고 있어 숙련된 검사방법이 필요하다. 반면 ELISA방법은 면역학적 검사방법으로 간염 C형 바이러스 검출에 널리 사용된다. 하지만 검사기관에 따라 기준도 다르고 진단 키트들에 따라 결과가 다르게 나오기도 한다. 위음성, 위양성이 나타나지 않도록 간염 C형 바이러스를 검출하는 HCV 항체 진단 키트의 정도관리를 위해 참조 패널을 설정해야 한다.
○ 연구내용
인천 적십자에서 HCV로 판단된 혈액 샘플 70팩을 수집하였다. 샘플에서 RNA extraction하여 제작해 높은 primer로 RT-PCR을 행하였다. HCV subtype을 확인할 수 있는 primer를 제작하여 각 샘플에 대한 type을 확인 하였다. 각 회사에서 판매되는 anti-HCV 진단 키트를 이용하여 ELISA방법을 행하였다. 각각의 제조회사의 사용자 방법에 따라 검사를 시행하였고, 제조회사마다. 사용하는 혈청 혹은 혈장의양이 차이가 있었다.
가. ELISA kit의 제조회사간의 차이가 너무 많이 나타남.
나. 면역학적 검사법인 anti-HCV ELISA는 실험자에 따라 차이가 날 수 있는 것도 있을 수 있으나 반복된 검사에서도 kit 간 각 제조회사간 kit에 따라 기준의 차이 있음.
다. Anti-HCV ELISA 검사가 양성으로 나오는 경우는 현재 HCV 감염 상태이거나, 과거에 감염되었 다가 항체만 남아있는 경우를 가정하여 검사를 시행한 결과 low titier로 나타나는 많은 것에서 HCV negative가 나오고 각각의 kit에 따라 전혀 검출되지 않은 경우가 많음.
라. 항원제조과정에서의 문제점 혹은 과도하게 검출률을 높게 선정하여 발생할 수 있는 것에 의한 차이가 있을 수 있을 것으로 보임.
마. 재조합 항원의 비특이적 부위에 결합하는 혈청 내 비특이 항체 등으로 위양성이 나타날 수 있을 것으로 보이며, 결과에서도 유추할 수 있을 것으로 보임.
바. 4가지의 각각 다른 제조회사에 대하여 검사한 결과 일부 일치하는 결과를 보이는 것이 있는 것과 anti-HCV ELISA kit의 제조회사별 결과 차이가 약 60% 나타나고 있음. 결론으로 anti-HCV 항체에 대한 국가표준품의 제조에 문제점이 많은 부분에 대해서는 각각의 제조 회사별 kit의 표준화가 이루어져야 일정한 표준치의 산정을 할 수 있을 것으로 사료됨.
...[중략] 원문참조

다국어 초록 (Multilingual Abstract)

It is reported that anti-HCV positive rate is about 1.0-1.8% in Korean. To diagnose HCV, anti-HCV kit is generally used, but it has problems that pseudo-positive, pseudo-negative, mixed result are frequently reported. To establish reference panel of anti-HCV kit, we have collected 70 packs of serum sample from Red Cross of Incheon. We performed RT-PCR for typing and carried out ELISA.